骨髓間充質干細胞對牙髓損傷的修復及經典Wnt通路在其中的作用的體內研究.pdf

1、牙齒在受到外界各種刺激，如齲病、磨耗、外傷等，均可引起牙本質缺損，缺損到一定程度會導致牙髓出現一系列抵御刺激的自身修復反應。目前認為牙髓干細胞在牙本質-牙髓的損傷修復中具有非常重要的作用，然而，牙源性干細胞來源匱乏、擴增困難，且已有很多文獻報道了骨髓間充質干細胞（BMMSCs）可分化為多種細胞，如成骨細胞、軟骨細胞、肌細胞、神經細胞、皮膚細胞等，并且在骨、軟骨、肌腱、神經、皮膚損傷的修復中也起著重要作用，BMMSCs已被認為是組織再生修

2、復的重要種子細胞。目前許多研究證明經典Wnt信號通路在早期未分化細胞的分化、遷移等多方面起著重要作用。
　　牙齒是人體的器官之一，當牙髓損傷時，機體內BMMSCs是否參與其修復以及經典Wnt信號通路在其中的作用尚未見報道。本實驗將利用綠色熒光蛋白轉基因大鼠的骨髓間充質干細胞嵌合SD大鼠牙本質缺損模型研究BMMSCs在牙髓損傷修復中的作用，以及經典Wnt通路在這一修復過程中的調節(jié)作用。
　　實驗分為兩部分：
　　1.BM

3、MSCs與大鼠切牙Apicalbud復合后腎被膜下移植實驗
　　目的：探討經典Wnt信號通路在骨髓間充質干細胞向牙本質樣分化中的作用。
　　方法：將BMMSCs分為三組：（1）對照組：正常的BMMSCs，不經過任何處理；（2）Wnt3a組：BMMSCs經100ng/ml濃度的Wnt3a刺激48h；（3）DKK-1組：BMMSCs經100ng/ml濃度的DKK-1刺激48h。然后分別與大鼠切牙Apicalbud復合，移植到大鼠

4、腎被膜下，2周后取材，切片，HE和免疫組化染色觀察。
　　結果：三組移植物均有牙髓-牙本質復合體樣結構形成，與對照組相比，DKK-1組可見有更多的礦化組織形成，并有較多表達DMP-1、DSP的細胞，而wnt3a組僅形成極少的礦化組織，且僅有較少表達DMP-1、DSP的細胞。
　　結論：經典Wnt通路可能抑制BMMSCs向成牙本質樣細胞的分化及礦化的形成。
　　2.利用GFP-BMMSCs嵌合SD大鼠牙本質缺損模型研究B

5、MMSCs對牙髓損傷的修復以及經典Wnt通路的調節(jié)作用
　　目的：探討骨髓間充質干細胞是否參與牙髓損傷的修復以及經典Wnt通路在這一過程中的調節(jié)作用。
　　方法：利用綠色熒光蛋白轉基因大鼠骨髓間充質干細胞（GFP-BMMSCs）嵌合SD大鼠模型，實驗分為三組：（1）對照組：經尾靜脈所注射的GFP-BMMSCs為正常細胞，不經過任何刺激;（2）Wnt3a組：尾靜脈所注射的GFP-BMMSCs經100ng/ml濃度的Wnt3a刺

6、激48h;（3）DKK-1組:尾靜脈所注射的GFP-BMMSCs經100ng/ml濃度的DKK-1刺激48h。通過制備牙本質缺損構建牙髓損傷模型，于牙本質缺損5d,10d,15d后取材，切片，HE及免疫熒光染色，分別觀察牙髓的病理變化和損傷修復情況以及GFP-BMMSCs在牙髓組織中的分布情況和變化。
　　結果：（1）牙本質缺損組初期有牙髓充血，后期有修復性牙本質形成，免疫熒光染色可見牙髓組織中有熒光細胞的分布，且牙本質缺損組比正