基于量子點的核酸和蛋白質(zhì)分析新技術(shù)研究.pdf

1、復旦大學博士學位論文基于量子點的核酸和蛋白質(zhì)分析新技術(shù)研究姓名：宋文青申請學位級別：博士專業(yè)：藥劑學（藥物分析方向）指導教師：盧建忠201204摘要隨后將適配體量子點復合物加入到已結(jié)合有抗原的微孔中，適配體與抗原結(jié)合，通過檢測量子點的熒光強度即可確定蛋白質(zhì)的含量。與非HCR模式相比，該方法信號放大效果明顯，靈敏度顯著提高，選擇性好，并可對真實樣品進行快速準確地測定。與傳統(tǒng)的ELISA法相比，該方法更為簡便可控，原材料更加穩(wěn)定。2在以上單

2、組分DNA和蛋白質(zhì)檢測的基礎(chǔ)上，進一步將方法拓展至雙組分的同時測定。實驗采用量子點標記寡核苷酸解鏈溫度增強的原理，實現(xiàn)了雙組分小RNA分子的測定。實驗中對捕獲探針、報告探針和目標序列在不同的結(jié)合方式下溫度的影響進行了考察，結(jié)果表明在報告探針先與量子點結(jié)合后，再與目標序列和捕獲探針雜交時可達到與連接酶存在時同樣的效果，即增強了雙鏈DNA的穩(wěn)定性，解鏈溫度得到提高。選擇兩個不同粒徑的量子點標記對應的報告探針，僅需一步雜交反應即可將體系中三個

3、部分DNA、RNA和量子點結(jié)合，無需酶的使用即可對多個組分進行同時測定，并為短鏈核酸的分析提供了新的思路。為了進一步提高檢測靈敏度，將層層組裝的概念引入，以聚苯乙烯微球為核心，利用鏈霉親和素和生物素的高度親和性將量子點層層組裝至微球表面，最后結(jié)合可與目標序列雜交的報告探針，建立了一個目標分子對應多個熒光標記物的信號放大模式?；诹孔狱c激發(fā)光譜寬、發(fā)射光譜窄的特性，選用了兩個不同發(fā)射波長的量子點，使用同一激發(fā)波長即可對雙組分DNA(HIV

4、1，HIV2)進行高靈敏度的檢測。與未放大的方法比較，此方法靈敏度提高了100倍。3在熒光共振能量轉(zhuǎn)移體系中，為了避免光譜重疊或信號干擾，量子點常被用作供體或受體。本部分實驗將量子點作為熒光共振能量轉(zhuǎn)移中的供體，在夾心反應和均相體系競爭模式中，量子點均能與受體熒光染料Cy5之間通過DNA的雜交作用實現(xiàn)能量轉(zhuǎn)移，從而對目標序列進行測定。實驗首先對量子點和Cy5在載體上和均相溶液中的能量轉(zhuǎn)移現(xiàn)象進行了考察，并進一步引入酶切循環(huán)放大的概念，采