肉兔腸道菌群結(jié)構(gòu)同源復合微生態(tài)制劑的研究.pdf

1、基于腸道微生物組學的原理，依照古代獸醫(yī)用“糞茶”治療牲畜腹瀉的思路，選取肉兔為研究對象，從其糞便中富集發(fā)酵出以益生菌為主的復合微生態(tài)制劑，飼喂幼兔并觀察這種復合微生態(tài)制劑對肉兔的益生效果，并且設(shè)計了一種以ERIC-PCR基因指紋圖譜為基礎(chǔ)快速分析糞便主要菌群結(jié)構(gòu)的方法。本研究主要內(nèi)容包括：
　?、沤梃bCinquin等提出的新型固定化細胞發(fā)酵模型，設(shè)計了一種適宜于腸道有益菌群生長的厭氧固定化發(fā)酵裝置；為了驗證裝置的預期性能并篩選出適

2、宜的培養(yǎng)條件，用該裝置進行了腸道菌群培養(yǎng)試驗。培養(yǎng)時先用凝膠小球固定糞樣中的菌群，然后轉(zhuǎn)入裝置中進行發(fā)酵，結(jié)果表明裝置的最適發(fā)酵溫度與腸道相近為37℃，發(fā)酵成熟時間為20h，能提供有效的厭氧環(huán)境，對以雙歧桿菌為代表的腸道厭氧菌富集效果高達270倍，能夠很好的模擬腸道的發(fā)酵狀態(tài)。
　?、茷榱双@得最適發(fā)酵培養(yǎng)基，進行了一系列的碳氮源篩選試驗、pH試驗、單因素試驗、梯度爬坡試驗和響應面試驗。通過在培養(yǎng)基中添加雙歧桿菌促生長劑，對發(fā)酵培養(yǎng)

3、基進行優(yōu)化，得到了一種能夠使最終發(fā)酵產(chǎn)物中雙歧桿菌等益生菌的含量最高，而大腸桿菌等條件致病菌含量最低的培養(yǎng)基配方，為后面發(fā)酵制備復合微生態(tài)制劑做準備。
　　⑶為了能夠方便檢測糞樣中的菌群結(jié)構(gòu)變化，設(shè)計了一種基于ERIC-PCR DNA指紋圖譜技術(shù)的菌群結(jié)構(gòu)檢測方法。首先優(yōu)化出適合兔糞微生物的ERIC-PCR反應體系；然后通過選擇性培養(yǎng)基平板分離出糞樣中雙歧桿菌和大腸桿菌，提取基因組作ERIC-PCR分析，確定兔糞微生物基因指紋圖譜

4、中450 bp處為雙歧桿菌的特征條帶，1300與4000 bp處為大腸桿菌特征條帶，測定這3條條帶的亮度信息即可分析兩種菌的含量比例；最后經(jīng)發(fā)酵驗證，圖譜中的相應條帶亮度變化趨勢與平板計數(shù)所測結(jié)果相一致（相對亮度R與相對菌落數(shù)lg cfu的相關(guān)系數(shù)為0.9676），證明該檢測方法較為可靠。
　　⑷為了驗證所設(shè)計和制備的復合微生態(tài)制劑的益生效果，開展了初步的動物試驗，結(jié)果表明飼喂了復合微生態(tài)制劑的肉兔生長性能顯著提高，與空白對照組相