HSP70與TLR4-NFκB信號途徑在急性肺損傷發(fā)病機制中作用的實驗研究.pdf

1、目的：本實驗采用Wistar大鼠尾靜脈注射脂多糖（LPS）制備急性肺損傷模型（ALI），通過檢測熱休克蛋白70（HSP70）、Toll樣受體4（Toll-like receptor4，TLR4）、核轉(zhuǎn)錄因子 kappa B（NF-κB）及相關(guān)炎癥細胞因子的表達水平，探討 HSP70與TLR4/NF-κB信號途徑在急性肺損傷發(fā)病機制中的作用及相互調(diào)控關(guān)系。
　　方法：選用48只清潔級Wistar大鼠，隨機分為兩組：生理鹽水對照組（N

2、S組，24只）、急性肺損傷模型組（LPS組，24只），每組再細分為2、6、24小時三個亞組（每組各8只）。通過尾靜脈一次注射LPS（6mg/kg﹒body weight）制備急性肺損傷模型，測定各組大鼠在不同時間點的動脈血氣分析。動物麻醉后處死，取部分肺組織固定，采用蘇木精-伊紅染色法（hematoxylin-eosin staining，HE）觀測肺組織病理結(jié)構(gòu)的微觀變化情況。另取部分肺組織稱重后干燥來檢測濕/干重（W/D）比。此外，

3、利用酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）方法檢測血清中腫瘤壞死因子（TNF-α）、白介素-6（IL-6）和白介素-10（IL-10）的表達變化，實時定量PCR（Real Time-PCR）法測定肺組織HSP70、TLR4及NF-κB mRNA水平的變化。
　　結(jié)果：動脈血氣分析結(jié)果顯示，LPS組大鼠相比 NS對照組，均表現(xiàn)為持續(xù)性低氧血癥，PaO2隨著LPS給予的時間增長而顯著下降，肺組織W/D比值隨著給予LPS時間點的延長而明顯增高

4、，上述變化與NS對照組比較，各時間點均具有顯著性差異（P<0.05）。利用光學顯微鏡鏡觀測HE染色結(jié)果，可見肺組織間隔增寬，出現(xiàn)炎癥細胞浸潤及紅細胞外滲現(xiàn)象，肺泡腔明顯變窄，肺間質(zhì)滲出水腫、部分可見滲出損傷表現(xiàn)。利用半定量評分分析肺組織病理損傷，發(fā)現(xiàn)隨著給予LPS時間點的延長，病理損傷加重，評分值數(shù)增高。LPS組大鼠血清中TNF-α、IL-6、 IL-10的表達較NS組明顯升高，同時，HSP70在肺組織中的表達水平隨時間點推進逐漸升高，