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文檔簡介
1、本文為了解人類有關(guān)ghrelin、精氨酸、胰島素誘導(dǎo)低血糖和GHRH-GH軸之間的關(guān)系,我們觀察生長激素缺乏癥(growthhormonedeficiency,GHD)和特發(fā)性矮小癥(idiopathicshortstature,ISS)在空腹和GH藥物激發(fā)試驗各個時間點(diǎn)的血漿ghrelin水平,并研究不同類型GHD在GHRH激發(fā)試驗時各個時間點(diǎn)的血漿ghrelin水平。 研究對象和方法: 1.研究對象:2005年5月~
2、2005年9月在浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬兒童醫(yī)院內(nèi)分泌科住院的矮小男性兒童。納入標(biāo)準(zhǔn):青春前期,身高低于同年齡同性別標(biāo)準(zhǔn)身高二個標(biāo)準(zhǔn)差以下的矮小男性兒童,經(jīng)各項檢查排除了其他內(nèi)分泌疾病、營養(yǎng)性、骨代謝性疾病、染色體疾病等。其中10例為完全性生長激素缺乏癥(CGHD),平均年齡(10.50±2.35)歲;10例為特發(fā)性矮小(ISS),平均年齡(8.24±1.81)歲,均經(jīng)兩項生長激素藥物激發(fā)試驗(精氨酸和胰島素)明確為GHD和ISS,另10例為
3、已確診的GHD行GHRH激發(fā)試驗,平均年齡(10.55±2.99)歲,試驗前均禁食8-10小時,每次激發(fā)試驗的每個時間點(diǎn)采血測血漿ghrelin水平。10例正常健康男性兒童作為對照組檢測空腹血漿ghrelin水平,平均年齡(9.75±2.51)歲。所有兒童均征得家長同意進(jìn)入本課題的研究。 2.研究方法: (1)GH藥物激發(fā)試驗患兒空腹、靜臥留置靜脈塑料管備取血用,取0時測GH及ghrelin的基礎(chǔ)值,精氨酸按0.5g/k
4、g體重,溶于注射用水成10%溶液,于30分鐘滴完,在30、60和90min取血,分別測GH反應(yīng)值及ghrelin水平。次日行胰島素低血糖興奮試驗,胰島素(0.1U/kg)靜脈推注,注射15分鐘后血糖<2.5mmol/L有效,無效追加半量胰島素。分別在注射后30、60和90min采血,檢測GH反應(yīng)值及ghrelin水平。 經(jīng)兩項藥物激發(fā)試驗:GH峰值≥10μg/L診斷為ISS,GH峰值<10μg/L診斷為GHD,GH峰值<5μg/
5、L診斷為CGHD。 (2)GHRH激發(fā)試驗醋酸舍莫瑞林(海南中和藥業(yè)股份有限公司提供)1μg/kg/天,第1天靜脈注射,第2-4天皮下注射,第4天晚10時后禁食,第5天清晨空腹同樣劑量靜脈注射后于30、60和90min分別測GH反應(yīng)值及ghrelin水平。GH峰值≥5μg/L為下丘腦型GHD,GH峰值<5μg/L為垂體型GHD。 (3)Ghrelin的檢測采靜脈血2ml,注入含10%EDTA30μl和抑肽酶20μl的試管
6、中,充分混勻,靜置4~5小時后予3000rp離心15分鐘,分離血漿,凍存在-80℃冰箱內(nèi),血漿ghrelin水平包括有活性的N端辛?;痝hrelin和無活性的N端去辛?;痝hrelin,采用放射免疫試劑盒(美國鳳凰藥劑公司提供,杭州市二醫(yī)院放免中心專人檢測),測定靈敏度為10ng/L。測定批內(nèi)CV6%,批間CV12%。 (4)統(tǒng)計學(xué)分析所有資料采用SPSS11.5軟件分析,連續(xù)性正態(tài)分布計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,因ghreli
7、n呈非正態(tài)分布故先經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換,為方便計算ghrelin,我們將<10ng/L視為10ng/L。各組間均數(shù)的比較采用單因素方差分析(One-wayANOVA),兩兩比較采用最小顯著差異法(LSD方法)。不同組間的兩種GH藥物激發(fā)試驗中的ghrelin水平采用重復(fù)測量廣義線性模型分析,ghrelin峰值與GH峰值間進(jìn)行相關(guān)分析。以P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。 研究結(jié)果: 1.對照組、GHD組(10例GH藥物激發(fā),10例GHR
8、H激發(fā))和ISS組空腹血漿ghrelin水平(對數(shù)轉(zhuǎn)化)分別為6.80±0.45、5.39±1.75和6.19±0.60,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.024),LSD兩兩比較顯示對照組空腹血漿ghrelin水平明顯高于GHD組(P=0.008),但與ISS組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.229)。 2.不同GH藥物激發(fā)試驗中大部分時間點(diǎn)的血漿ghrelin水平是增加的,但GHD患兒中有2例血漿ghrelin水平非常低,除1例精氨酸
9、激發(fā)90分鐘高于10ng/L外,其余時間點(diǎn)血漿ghrelin水平均低于10ng/L。 3.ISS組在兩項GH藥物激發(fā)試驗每個時間點(diǎn)的血漿ghrelin水平均略高于GHD組,但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。 4.將年齡作為混雜因素分析,采用重復(fù)測量廣義線性模型分析兩項GH藥物激發(fā)試驗期間血漿ghrelin水平。發(fā)現(xiàn)在兩項藥物激發(fā)試驗中,血漿ghrelin水平和年齡無顯著性相關(guān)(P=0.659,P=0.125)。精氨酸激發(fā)試
10、驗期間的不同時間點(diǎn)血漿ghrelin水平差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.003),但兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.100);而在胰島素激發(fā)試驗中,GHD和ISS組間血漿ghrelin水平差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.029),各個時間點(diǎn)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.216)。相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)兩種GH藥物激發(fā)試驗中,ghrelin峰值和GH峰值無顯著性相關(guān)(r=0.161,P=0.498;r=0.207,P=0.382)。 5.10例行GH
11、RH激發(fā)試驗GHD患兒中,6例為下丘腦型GHD(GH峰值≥5μg/L),4例為垂體型GHD(GH峰值<5μg/L),其中發(fā)現(xiàn)有1例下丘腦型GHD患兒血漿ghrelin在各時間點(diǎn)均<10ng/L,水平非常低。GHRH激發(fā)時不同時間點(diǎn)的平均ghrelin水平(對數(shù)轉(zhuǎn)化)分別是6.01±1.39、6.06±1.44和5.86±1.83,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.958),但ghrelin峰值與GH的峰值呈負(fù)相關(guān)(r=-0.035,P=0.03
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