四川各地黑山羊分子遺傳特征研究.pdf

1、黑山羊主要產于我國的南方及東南亞，久負盛譽。其獨特之處在于全身黑毛，生長發(fā)育快，板皮厚滿，皮毛質軟細小，瘦肉率高，含脂量低，肉質鮮嫩，味美膻氣少。從目前國際、國內形勢看，我國黑山羊產業(yè)前景看好。據業(yè)內人士分析認為，我國黑山羊市場潛力巨大，出口創(chuàng)匯前景看好。當前國際大氣候的變化為黑山羊產業(yè)發(fā)展帶來了新的機遇，由于黑山羊品種不同，其品質也就各不相同，故品種的認定就自然成為我國黑山羊產業(yè)急需要解決的問題 四川省黑山羊資源比較豐富，過

2、去的研究多為品種性能測定與評價等方面，對品種的起源、群體間的遺傳差異、黑山羊的品種分化及相似性研究甚少。特別是利用分子標記研究黑山羊大群體的遺傳結構和遺傳多樣性，尚未見有報道。 首先，我們參閱以往牛、山羊和綿羊等RAPD研究的文獻，選取98個引物，經過反復篩選，從中挑選出30個重復性好的多態(tài)引物，運用構建總DNA基因池的方法，對黑山羊、南江黃羊、北川白山羊、成都麻羊4個山羊品種和藏綿羊進行RAPD分析，并重點進行了引物篩選和實驗

3、條件的優(yōu)化，建立了適宜山羊RAPD的反應體系，計算了各品種間的遺傳距離指數(shù)，探討了彼此的親緣關系。驗證了實驗方法本身的可靠性。 上面實驗的基礎上，我們利用16條多態(tài)性好的引物，對分布于四川省不同區(qū)域的9個黑山羊種群共540個個體逐一進行了隨機擴增多態(tài)DNA(RAPD)分析。結果表明：16條多態(tài)性引物在9個黑山羊種群中，共擴增出170個能完全重復且表現(xiàn)多態(tài)性的RAPD標記，各標記的大小在0.1-2.5kb之間。采用Nei氏標準距離

4、對不同品種的遺傳關系進行分析，黑山羊群體間的遺傳距離在0.105l一0.2978之間。金堂黑山羊與富順黑山羊之間相似系數(shù)最大，為0.9002。其次是嘉陵黑山羊與營山黑山羊之間相似系數(shù)為0.8953，會理黑山羊與江安黑山羊之間相似系數(shù)最小，為0.7424。群體基因分化系數(shù)(Gst)為0.2766，說明黑山羊種群的分化程度還比較低。用UPGMA法構建了黑山羊群體間樹狀聚類圖，結果顯示：嘉陵黑山羊與營山黑山羊首先聚—起，金堂黑山羊與樂至黑山羊

5、也先聚—起，說明它們親緣關系較近，可能起源于共同的原始祖先。本實驗的結果為黑山羊品種的保護提供了重要的科學依據。 其次，我們利用20個多態(tài)性較強、重復性好的隨機引物對四川多個黑山羊種群的成年(1.5～2歲)黑山羊96只個體的血樣DNA進行擴增，20個引物共擴增出225條多態(tài)的RAPD條帶。對給定的標記，將“有帶(1)”、“無帶(0)”兩類個體看作獨立樣本，采用SPSS軟件的Compare Means中的Independent-s

6、amples FTest來比較兩樣本各數(shù)量性狀平均值的差異。并根據兩獨立樣本間個體表型值的分布篩選與性狀真實關聯(lián)的分子標記。結果表明，在黑山羊群體中共篩選到5個分子標記分別與不同性狀相關，其遺傳基礎可能是該標記與控制性狀的QTL或主基因連鎖。 第三，我們以10個微衛(wèi)星標記，對四川樂至黑山羊、金堂黑山羊、富順黑山羊、白玉黑山羊、會理黑山羊、嘉陵黑山羊、營山黑山羊、合江黑山羊、江安黑山羊進行了遺傳多態(tài)性研究。結果表明，10個微衛(wèi)星座

7、位在9個黑山羊種群中為高度多態(tài)座位?；贜ei氏標準遺傳距離Da，采用13PGMA方法構建了系統(tǒng)發(fā)生樹。9個黑山羊種群遺傳距離在0.386-O.769之間，聚為4類，嘉陵黑山羊與營山黑山羊親緣關系最近，在D=0.386處聚為1類；富順黑山羊與江安黑山羊先在D=0.428處聚為l類后再在D=0.456處與合江黑山羊聚為1類；此外金堂黑山羊與樂至黑山羊在D=0.437處聚為1類；白玉黑山羊與會理黑山羊在D=0.489處聚為1類。結果同時顯示

8、9個黑山羊種群的分子系統(tǒng)發(fā)生關系與生態(tài)地理分布一致。本研究的10個微衛(wèi)星測定9個黑山羊種群平均PIC和平均雜合度均大于0.5，說明9個黑山羊種群內遺傳多樣性均較高。此結果同RAPD分析和mtDNA測序分析的結果一致。 最后，我們采用DNA測序技術首次測定了四川9個黑山羊品種(類群)30個個體線粒體DNA控制區(qū)(D-100p)全序列，結果表明：四川黑山羊線粒體DNA控制區(qū)全序列長度為1212bp，T、C、A、G4種核苷酸的含量分別

9、為28.9％、25.9％、31.2％、14％。檢測到87個變異位點，約占分析位點總數(shù)的7.18％，核苷酸變異類型有轉換、顛換、缺失3種。確定了25種單倍型，單倍型H7、H11和H13為四川黑山羊的主體單倍型，各單倍型在品種間分布不平衡，所測定的9個黑山羊品種(類群)單倍型多樣度平均為0.9839±0.014l，說明四川黑山羊D-loop單倍型類型豐富。四川黑山羊品種間核苷酸分歧度(Dxy)約為1.0％-3.6％，品種間雙參數(shù)距離范圍為0