免疫抑制藥物對成人胰島細(xì)胞毒性作用及其防治措施的體外研究.pdf

1、目的：成人胰島細(xì)胞移植是治療1型糖尿病(T1DM)有效的途徑。免疫抑制藥物對胰島細(xì)胞的毒性作用是阻礙臨床廣泛開展成人胰島移植的主要原因之一。本文旨在探討免疫抑制藥物對體外培養(yǎng)的成人胰島細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用的機(jī)制，并試圖尋找合理的防治措施。 方法：1.按照胰島分離、純化的改良方法進(jìn)行成人胰島細(xì)胞的分離和純化，利用DTZ染色法鑒定胰島純度、AO-PI熒光染色法鑒定胰島活率，并完成胰島的體外培養(yǎng)。2.選擇臨床常用或即將使用的免疫抑制藥物(

2、MP、CsA、FK506、MPA、Rapa、FTY720)，分別以不同濃度與體外分離、純化后的成人胰島共培養(yǎng)，24h后透射電鏡下觀察胰島形態(tài)學(xué)改變、MTT法檢測胰島活力、胰島素釋放試驗(yàn)檢測胰島功能。3.選擇胰島移植中使用或可能使用的免疫抑制藥物(FK506、MPA、Rapa、FTY720)，以較高濃度與煙酰胺(NAA，10mmol/l)、己酮可可堿(PTX，5mmol/l)及胰島共培養(yǎng)，3d后檢測培養(yǎng)液上清中的TNFα含量、進(jìn)行胰島素釋

3、放試驗(yàn)、TUNEL法檢測胰島細(xì)胞凋亡。4.核因子κB的抑制劑PDTC、上述四種免疫抑制藥物、成人胰島共培養(yǎng)，3d后進(jìn)行胰島素釋放試驗(yàn)及凋亡檢測，并利用EMSA法檢測胰島細(xì)胞核內(nèi)NF-κB的活性。 結(jié)論：1.DTZ染色和AO-PI熒光染色可以對分離、純化后的胰島質(zhì)量進(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定。2.MP、CsA、FK506、MPA具有較為明顯的胰島細(xì)胞毒性作用，Rapa和FTY720的胰島細(xì)胞毒性較小。3.PTX通過對藥物作用下胰島細(xì)胞分泌TN