重癥肌無力被動轉(zhuǎn)移幼鼠的粘膜免疫耐受研究.pdf

1、第一部分重癥肌無力被動轉(zhuǎn)移幼鼠模型的建立 目的：利用乙酰膽堿受體(AChR)單克隆抗體-mAb35，以不同劑量腹腔注射給C57BL／6(B6)幼年小鼠，建立重癥肌無力被動轉(zhuǎn)移模型(PTMG)，摸索成功建立動物模型的mAb35有效劑量，為進(jìn)一步研究MG的發(fā)病機理和相應(yīng)的免疫治療提供實驗動物模型。 方法：將實驗組分為3組(E1、E2、E3)，分別經(jīng)腹腔注射含mAb350．5、1．O、1．5mg／kg的Ringer’s液0．2

2、ml給B6幼年小鼠，對照組(N)各只注射不含mAb35的Ringer’s液0．2ml。觀察小鼠的臨床表現(xiàn)，并用甲基硫酸新斯的明進(jìn)行藥理學(xué)試驗，低頻重復(fù)電刺激檢查(RNS)，ELISA法檢測血清中的AChRAb水平，Kamovsky-Roots法行乙酰膽堿酯酶組織化學(xué)染色和電鏡下超微結(jié)構(gòu)觀察，以判斷模型建立是否成功。 “結(jié)果：經(jīng)腹腔注射含mAb35的Ringer’s液12～24h后，實驗組小鼠出現(xiàn)體重減輕、活動減少、肌力降低等臨床

3、癥狀，其癥狀輕重、發(fā)展速度與注射劑量呈正相關(guān)。其中實驗組1(E1)小鼠僅表現(xiàn)一過性體重減輕，活動減少，隨后可自發(fā)緩解；實驗組2(E2)小鼠則依時間變化出現(xiàn)典型的MG癥狀；實驗組3(E3)小鼠在36h時左右有5只因嚴(yán)重的肌無力及呼吸肌麻痹而死亡。而對照組小鼠活動、攝食如常，無一例出現(xiàn)臨床癥狀。 實驗組小鼠表現(xiàn)MG臨床癥狀(肌無力和易疲勞性)、電生理改變(肌電圖衰減)、藥理學(xué)特征(新斯的明試驗陽性)、血清學(xué)抗體改變(AChRAb升高

4、)及超微結(jié)構(gòu)發(fā)生病理改變等均與MG患者相似，符合MG的病理生理特點。 結(jié)論：C57BL／6小鼠為建立PTMG動物模型的敏感品系。利用AChR單克隆抗體-mAb35可在幼年B6小鼠成功建立PTMG模型，其有效劑量為1．0mg／kg，該方法簡便、可靠，為研究兒童MG提供了一種很好的實驗動物模型。 第二部分 重癥肌無力被動轉(zhuǎn)移幼鼠的粘膜免疫耐受研究 目的：采用特異性耐受原一雙類似物(Lys262-Ala207)

5、，通過鼻腔給予重癥肌無力被動轉(zhuǎn)移(PTMG)B6幼鼠，觀察其對小鼠模型發(fā)病過程的影響，并進(jìn)行臨床表現(xiàn)觀察、免疫學(xué)指標(biāo)檢測，評價其臨床療效、探討其作用機理及該療法在模型應(yīng)用中的可行性，以期為兒童MG的治療提供一種理論依據(jù)和新的治療方法。 方法：用C57BL／6(B6)幼年小鼠建立PTMG模型。實驗動物分為3組：耐受組(TI)、模型組(T2)、對照組(Con)。Tl組選取雙類似物(Lys262-Ala207)作為耐受原，在致敏前連續(xù)

6、10d經(jīng)鼻腔滴入(250μg/只)，誘導(dǎo)粘膜耐受，T2組為未用耐受原的PTMG模型組，Con組為正常對照組。觀察實驗各組小鼠體重、臨床評分及各項指標(biāo)的改變情況，檢測主要免疫學(xué)指標(biāo)(IL一4、IFN-y、TGF—p1)的水平。 結(jié)果：T2組小鼠表現(xiàn)典型的PTMG癥狀；T1組小鼠耐受治療有效，臨床癥狀較輕，神經(jīng)電生理(肌電圖衰減不明顯，RNS衰減率<10％)，血清AChRAb含量降低，外周血中TGF—p1分泌顯著升高，IL一4、IF

7、N-?分泌降低；而對照組(Con)小鼠無任何異常的臨床表現(xiàn)。 結(jié)論： 1．雙類似物(Lys262-Ala207)經(jīng)鼻粘膜耐受對預(yù)防實驗幼鼠發(fā)生PTMG具有較好的效果，除臨床癥狀較輕外，免疫系統(tǒng)功能也發(fā)生明顯的改變，即：血清AChRAb含量明顯減少，外周血中TGF--p1分泌增高，IL-4、IFN-~分泌降低。 2．雙類似物免疫耐受的療效可能與免疫系統(tǒng)各功能體系的協(xié)同作用密切相關(guān)。 3．本研究證實雙類似物經(jīng)