系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者DNA甲基化相關(guān)基因表達研究.pdf

1、目的：系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是一種病因未明的累及全身多個系統(tǒng)的慢性進行性、反復(fù)發(fā)作和緩解的自身免疫性疾病，其具體發(fā)病機制尚不得而知。DNA甲基化在基因表達的調(diào)控中具有重要的作用，目前已證實SLE患者體內(nèi)存在DNA甲基化狀態(tài)的紊亂，主要表現(xiàn)為許多與免疫細胞激活有關(guān)的粘附分子、細胞因子等基因啟動子區(qū)的低甲基化。理論上，包括DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNA methyltransferase

2、，DNMTs)、DNA去甲基化酶(DNAdemethylase，主要為mbd2)和甲基化結(jié)合蛋白(methyl-CpG binding protein，MBP，其中以MeCP2為最重要)等在內(nèi)的DNA甲基化相關(guān)基因可以共同影響DNA甲基化狀態(tài)以及SLE相關(guān)基因的表達與活性，但迄今為止尚缺乏有關(guān)的研究證據(jù)。本課題中我們采用半定量的RT-PCR方法檢測了DNA甲基化相關(guān)基因(DNMTl、DNMT3A、DNMT3B、mbd2、MeCP2)在S

3、LE患者外周血單核細胞(peripheral bloodmononuclear cells，PBMC)中的表達水平及它們之間的相關(guān)性，分析了各基因表達與SLE疾病嚴重程度之間的關(guān)系。同時，我們檢測SLE相關(guān)基因淋巴細胞功能相關(guān)抗原-1(1ymphocyte function-associated antigen 1，LFA-1)亞基CDlla在SLE患者PBMC中的表達水平，并將其作為間接反映基因甲基化程度高低的指標，分析DNA甲基化相

4、關(guān)基因的表達對DNA甲基化狀態(tài)的影響，探討它們在SLE發(fā)病中的作用，希望進一步闡明SLE的發(fā)病機制，并為該病的防治提供新的思路。 材料與方法：根據(jù)1997年美國風(fēng)濕協(xié)會修訂的SLE的診斷標準收集34例SLE的患者，并根據(jù)系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病活動指數(shù)(systemic lupus erythematosusdisease activity index，SLEDAI)將患者分為緩解期(17例)與活動期(17例)。正常對照組17例。分離

5、獲得患者外周血單核細胞并提取總RNA。以RT-PCR半定量法檢測DNMTI、DNMT3A、DNMT3B、mbd2、MeCP2及CDlla基因的表達情況。采用兩樣本均數(shù)差別的，檢驗分別比較對照組、SLE緩解期與活動期患者PBMC中各基因表達有無差異，以相關(guān)分析等統(tǒng)計學(xué)方法研究各基因之間以及分別與SLEDAI評分之間的關(guān)系。 結(jié)果：我們的研究表明(1)SLE緩解期患者PBMC中DNMTl表達明顯低于對照組(t=5.90，P=0.00

6、01)；SLE活動期患者PBMC中DNMTl表達明顯低于對照組(t=6.93，P=0.0001)，但與SLE緩解期患者無明顯差異(f=1.75，P=0.0895)。(2)對照組、SLE緩解期及活動期患者PBMC中DNMT3A表達兩兩之間無明顯差異。(3)對照組、SLE緩解期及活動期患者PBMC中DNMT3B皆無表達。(4)SLE緩解期患者PBMC中mbd2表達明顯高于對照組(t=12.8，P=0.0001)；SLE活動期患者PBMC中m

7、bd2表達明顯高于對照組(t=20.0，P=0.0001)；SLE活動期患者PBMC中mbd2表達明顯高于SLE緩解期(t=8.89，P=0.0001)。 (5)對照組、SLE緩解期及活動期患者MeCP2表達兩兩之間無明顯差異。(6)SLE緩解期患者PBMC中CDlla表達明顯高于對照組(t=5.35，P=0.0001)；SLE活動期患者PBMC中CDlla表達明顯高于對照組(t=6.57，P=0.0001)；SLE活動期患者PBMC中

8、CDlla表達明顯高于SLE緩解期(t=2.99，P=0.0061)。 (7)17例正常人PBMC中，mbd2的表達與MeCP2的表達成正相關(guān)(r=0.550，P=0.0222)，其余兩兩表達之間都無相關(guān)性。 (8)34例SLE患者(包括緩解期及活動期)PBMC中，CDlla的表達與mbd2的表達成正相關(guān)(r=0.392，P=-0.0218)，其余兩兩表達之間均無相關(guān)性。 (9)34例SLE患者(包括緩解期與活動期)PBMC中，CDll

9、a的表達與SLEDAI評分成正相關(guān)(r=0.539，P=0.001)；mbd2的表達與SLEDAI評分成正相關(guān)(r=0.737，P=0.0001)。其余基因表達與SLEDAI評分無相關(guān)性。 結(jié)論：我們的研究結(jié)果提示(1)SLE患者PBMC中存在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶l表達的降低以及去甲基化酶mbd2表達的增高。兩者可能單獨或在一定程度上相互配合導(dǎo)致了DNA甲基化程度的降低，進一步引起SLE相關(guān)基因的過度表達，最終促使了SLE的發(fā)病。(