基于核酸適體的8-羥基脫氧鳥苷光學(xué)傳感方法研究.pdf

1、8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)是一種DNA氧化損傷的產(chǎn)物，是在氧化應(yīng)激過程中，DNA被攻擊所形成[1]。8-羥基脫氧鳥苷可誘導(dǎo)基因突變，堿基錯配等。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，它與多種癌癥的發(fā)生以及環(huán)境污染具有一定的相關(guān)性，是國際公認(rèn)的重要的DNA氧化損傷的生物標(biāo)志物。所以，建立一種特異性強(qiáng)、靈敏、簡便的8-OHdG檢測方法，對環(huán)境監(jiān)測、癌癥的診斷等都具有重要意義。
　　本文第二章，我們建立了一種靈敏度較高、特異性強(qiáng)的比色傳感法。此法通過8-羥

2、基脫氧鳥苷和特異性的適體結(jié)合，適體構(gòu)象發(fā)生變化，形成穩(wěn)定的G-四聚體，在hemin-ABTS2--H2O2體系中可發(fā)生顏色變化，且與8-OHdG濃度在466 pmol/L到247 nmol/L的濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。檢出限達(dá)140pmol/L。相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.23％–3.26%（n=11)，加標(biāo)回收率為95.8%–106.5%。該方法無需標(biāo)記，裸眼可見顏色變化，是一種成本低廉，特異性強(qiáng)，靈敏度高的新方法，已成功應(yīng)用于

3、人體尿樣中痕量8-OHdG的測定，結(jié)果滿意。
　　本文第三章，建立了一種基于Apt-NMM-8-OHdG體系的檢測8-OHdG的新方法。NMM本身具有微弱的熒光，而且可以特異性的與G-四聚體結(jié)合，當(dāng)Apt與K+同時存在，可形成G-四聚體，使得NMM的熒光強(qiáng)度增強(qiáng)。而當(dāng)溶液中加入了8-OHdG之后，形成結(jié)構(gòu)更為緊密的G-四聚體，此時8-OHdG-Apt的結(jié)合力大于G-四聚體與NMM的結(jié)合力。從而NMM從G-四聚體中游離出來，熒光強(qiáng)度

4、降低。兩者的熒光強(qiáng)度差△F與8-OHdG的濃度之間有很好的線性關(guān)系。據(jù)此建立一種新的8-OHdG的熒光猝滅新方法。在實(shí)驗(yàn)的最佳條件下，溶液在610nm處有特異性的熒光峰,8-OHdG濃度在3.96×10?9~2.11×10?7 mol/L范圍內(nèi)，與溶液的熒光強(qiáng)度之間具有良好的線性關(guān)系。線性回歸方程為△F=34.1+47.9c（×10?7mol/L），檢出限為1.19×10?9 mol/L。該方法精密度良好，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.23%~3.