巨噬細胞功能相關基因與環(huán)境因素在肺結核病中作用的流行病學研究.pdf

1、背景:大量研究已經證實結核病的發(fā)生、發(fā)展與宿主遺傳因素和環(huán)境因素的共同作用相關，同時大量遺傳易感性相關基因（如HLA、VDR、NRAMP1、SP110、IFN—γ、TLR2、IL-12RB1等）及傳統(tǒng)宏觀因素（吸煙、經濟狀況、通風、BCG接種史、病人接觸史等）與結核病的相關性已經被認識。但現(xiàn)代流行病學病因模型認為，這些影響結核病發(fā)生發(fā)展的基因、環(huán)境因素間除外單獨作用，還存在大量基因-基因、基因-環(huán)境因素以及環(huán)境因素間的相互作用，僅考慮某

2、個（些）因素與結核病之間的關系，難以真正闡明結核病病因和發(fā)病機制，但目前相關多基因、多環(huán)境因素間的交互作用在結核病發(fā)生、發(fā)展中影響的研究相對缺乏。
　　結核分枝桿菌(MTB)在人體內以有菌細胞免疫為主，巨噬細胞是MTB最主要的宿主細胞和效應細胞，其活性和功能對于MTB的免疫應答以及感染后的轉歸起著十分關鍵的作用。因此，可影響巨噬細胞功能、活性的相關基因VDR、NRAMP1和SP110等基因備受關注，探討這三個基因和環(huán)境因素在結核病

3、發(fā)生中的交互作用，對于理解認識其病因有重要意義。
　　大量流行病學研究和系統(tǒng)評價結果顯示，遺傳因素存在顯著地區(qū)和人群差異。在中國人群中，VDR-Fok(I)（ff）、NRAMP1-3'UTR(TGTG+-)與結核病存在較穩(wěn)定且較強的聯(lián)系（OR≥2.0，95％CI下限大于1）。目前關于SP110基因與結核病易感性相關性研究為數尚不多，且報道的結論并不一致，對此進行的系統(tǒng)評價也未發(fā)現(xiàn)SP110基因與結核病的明顯關聯(lián)，結果并不像當初設想

4、。推測可能與SNP多態(tài)性位點檢測覆蓋不全、相關研究對象數量不夠等有關。
　　綜上所述，本研究第一部分將采用傳統(tǒng)病例對照研究方法，擴大檢測SP1l0基因SNP位點數量，采用靈敏度、特異度均較高的高分辨熔解曲線分析技術(high-resolutionmeltinganalysis，HRM)檢測SNPs，以進一步明確或驗證本地區(qū)SP110基因多態(tài)性與結核病的關聯(lián)性，并為第二步研究交互作用評價位點的選擇提供依據。第二部分將采用單純病例研究

5、方法，結合前期研究結果，選擇被大多數研究認可與結核病相關的環(huán)境因素（吸煙、結核病病例接觸史、居室經常通風等）和易感基因位點(VDR-Fok(I)、NRAMP1-3'UTR以及SP110基因位點），重點探討它們間的交互作用，為進一步認識、理解結核病病因和機制及深入研究奠定基礎。
　　第一部分SP110基因多態(tài)性與肺結核病關聯(lián)的病例對照研究
　　研究方法:以重慶市結核病防治所和重慶市沙坪壩區(qū)疾病預防控制中心（結核病防治所）連續(xù)收

6、集的新確診的肺結核病病例作為病例組（排除伴其他傳染病和腫瘤等慢性疾病患者）;以獻血中心、體檢中心同期收集的健康成人作為對照組，要求年齡和性別與病例組成組匹配。每個對象均采用面對面詢問方式填寫調查表，提取全血基因組DNA，并采用HRM方法進行SP110基因20個位點多態(tài)性檢測。最終完成所有信息收集、標本檢測的病例和對照分別為198和195人。
　　主要結果與結論:1.人均年收入（少與8000元）、結核病患者接觸史、吸煙（被動吸煙）、

7、人居平均面積（小于10m2）、居室不通風、工作強度（偏重）是本地區(qū)結核病發(fā)生的危險因素（OR值及OR95％CI下限均大于1）;未見卡介苗(BCG)接種史和睡眠時間長短與結核病間的明顯相關性(P＞0.05)。2.SP110基因20個位點中，未檢測出sp110int10的多態(tài)性。3.rs722555G/G、rs1135791C/T和rs2114592T/T可能是本地區(qū)結核病發(fā)生的危險因素（OR值及OR95％CI下限均大于1）。4.rs722

8、555G/G、吸煙、結核病患者接觸史進入多因素非條件logistic回歸模型，各因素OR值及OR95％CI值與因素單獨存在時有明顯差異，這三個因素可能是本地區(qū)結核病的獨立危險因素，同時相互間存在一定的交互作用。
　　第二部分VDR、NRAMP1、SP110基因與環(huán)境因素在肺結核病中交互作用的單純病例研究
　　研究方法:在重慶市結核病防治所和重慶市沙坪壩區(qū)疾病預防控制中心（結核病防治所）連續(xù)收集新確診、居住本地10年以上的肺結

9、核病病例組成研究對象。每個對象均面對面調查結核病主要相關因素（吸煙、結核病病例接觸史、居室經常通風等）暴露情況，并采用高分辨熔解曲線分析(high-resolutionmeltinganalysis，HRM)方法檢測VDR-Fok(I)、NRAMP1-3'UTR以及SP110基因rs722555多態(tài)性。最終完成所有信息收集和標本檢測的病例共426人納入分析。把具備某一個環(huán)境因素（或基因型）的病例作為“病例組”，而其他病例作為“對照組”，

10、計算P值、OR值及OR95％CI以評價相互間的交互作用。
　　主要結果與結論:1.426名病例年齡、性別等基本特征與一般病例類似。2.rs722555、VDR-Fok(I)和NRAMP1-3'UTR基因型分布符合遺傳平衡狀態(tài)（Hardy-Weinberg檢驗）。3.rs722555(G/G)與吸煙和結核病病例接觸史、VDR-Fok(I)(ff)與吸煙、居室不通風和結核病病例接觸史以及NRAMP1-3'UTR(TGTG+/-)與吸煙