抗氧化劑二巰代氨基甲酸吡咯烷對(duì)骨肉瘤MG63細(xì)胞增殖和凋亡的影響的研究.pdf

1、目的：
　　 骨肉瘤是最常見(jiàn)的原發(fā)性間葉組織惡性骨腫瘤,好發(fā)于青少年,惡性程度高,預(yù)后較差,5年生存率僅有20％。目前雖在術(shù)前術(shù)后給予化療后生存率有所提高,但對(duì)于化療耐受和轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的病例,化療或手術(shù)常難以奏效.
　　 除了傳統(tǒng)的手術(shù)治療、化療外,骨肉瘤的綜合治療特別是基因治療為骨肉瘤的治療取得了新的進(jìn)展。IAP家族因在凋亡抵抗中可能起重要作用而日益受到重視,Livin是這個(gè)家族中的新成員,主要在腫瘤細(xì)胞中高表達(dá),其表達(dá)水

2、平的增高可導(dǎo)致細(xì)胞抗凋亡能力的增強(qiáng)。因此抑制Livin在骨肉瘤細(xì)胞中的表達(dá),恢復(fù)骨肉瘤細(xì)胞對(duì)凋亡的敏感性,可能會(huì)提高骨肉瘤臨床治療效果。
　　 現(xiàn)在發(fā)現(xiàn),抗氧化劑二巰代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)可下調(diào)IAP家族中CIAP1和CIAP2等分子的表達(dá),促進(jìn)細(xì)胞凋亡,但目前它與Livin表達(dá)之間的關(guān)系尚不清楚.本研究觀察了在NF-kB抑制劑PDTC誘導(dǎo)骨肉瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡的過(guò)程中,Livin和caspase-3表達(dá)水平的變化,探討PDT

3、C在促凋亡途徑中可能發(fā)揮的作用。
　　 方 法
　　 以不同濃度(0、50、100、200、400μmol/L)PDTC作用于骨肉瘤MG63細(xì)胞不同時(shí)間(24h,48h)后,(1)采用MTT法測(cè)定其PDTC對(duì)MG63細(xì)胞的抑制率；(2)采用流式細(xì)胞儀測(cè)定MG63細(xì)胞的凋亡情況；(3)采用RT-PCR和Western-blot法檢測(cè)MG63細(xì)胞Livin和caspase-3的mRNA和蛋白的表達(dá)情況。
　　 結(jié) 果

4、
　　 1、不同濃度PDTC作用24h,48h后對(duì)MG63細(xì)胞生長(zhǎng)有明顯抑制作用,并呈時(shí)間、劑量依賴性。
　　 2、流式細(xì)胞儀的結(jié)果顯示,50、100、200和400μmol/LPDTC作用48h后的凋亡率分別6.78±1.07％,14.45±1.56％,20.23±1.02％,28.65±1.87％為與對(duì)照組2.80±0.35％相比,差異有顯著性,且各濃度組之間差異均有顯著性(p<0.01),100μmol/LPDTC

5、作用24、48 h后的凋亡率分別為10.04±1.07％,14.45±1.56％與對(duì)照組2.80±0.15％相比,差異有顯著性,且各時(shí)間組之間差異也均有顯著性(p<0.01)。
　　 3、RT-PCR和Westem-blot法分析顯示,PDTC作用于MG63細(xì)胞后可降低Livin的mRNA和蛋白的表達(dá),增加caspase-3的mRNA和蛋白的表達(dá),呈現(xiàn)劑量依賴性。且Livin的表達(dá)與PDTC的作用以及骨肉瘤細(xì)胞凋亡率呈劑量負(fù)相關(guān)

6、,與caspase-3的表達(dá)也呈劑量負(fù)相關(guān)。
　　 結(jié) 論
　　 1、PDTC可明顯抑制人骨肉瘤MG63細(xì)胞,并使細(xì)胞周期受到阻滯,進(jìn)一步誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡,從而發(fā)揮抗腫瘤作用。抑制細(xì)胞與誘導(dǎo)凋亡呈劑量依賴關(guān)系。
　　 2、從Western-blotting的結(jié)果得出PDTC可使Livin表達(dá)水平降低,并使caspase-3表達(dá)水平增加。表明PDTC在促進(jìn)凋亡中具有重要作用。
　　 3、在誘導(dǎo)MG63細(xì)胞凋