自制顆粒酶B兔多克隆抗體用途及脾臟各部分主要免疫細(xì)胞組成檢測(cè).pdf

1、背景：
　　顆粒酶B（granzyme B）是一種絲氨酸蛋白酶，殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞或者CTL細(xì)胞）分泌的穿孔素在靶細(xì)胞上“打孔”，顆粒酶B通過穿孔素打的“孔”進(jìn)入靶細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞造成損傷。目前發(fā)現(xiàn)人的顆粒酶B全長(zhǎng)分子量為32kDa，本課題組前期實(shí)驗(yàn)和他人實(shí)驗(yàn)均發(fā)現(xiàn)另外一種分子量的顆粒酶B：35kDa顆粒酶B。進(jìn)一步研究表明兩種形式的顆粒酶B定位及功能存在差異，商品化抗體不能滿足這方面的研究，因此有必要自制抗體研究其功能及定位。

2、>　　脾臟是機(jī)體最大的免疫器官，其免疫細(xì)胞的變化可反映全身的免疫反應(yīng)。其取材方便、細(xì)胞數(shù)多、可用于多個(gè)實(shí)驗(yàn)，如免疫組化、PCR、流式、免疫熒光等。因此，在實(shí)驗(yàn)中通常將部分脾臟代替整個(gè)脾臟進(jìn)行某種實(shí)驗(yàn)，但缺乏相關(guān)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本論文第二部分旨在為實(shí)際的實(shí)驗(yàn)操作提供一些理論支持。
　　目的：
　?。?）探索自制抗血清是否能檢測(cè)人的32kDa和35kDa顆粒酶B，其是否適用于多種實(shí)驗(yàn)方法。
　?。?）脾臟各部分主要免疫細(xì)胞的比

3、例是否存在差異。
　　方法：
　　（1）利用蛋白印跡、免疫組織化學(xué)、免疫熒光、免疫細(xì)胞化學(xué)法，使用抗血清檢測(cè)顆粒酶B并摸索其合適的使用濃度。
　?。?）取C57和bm12小鼠脾臟，按脾臟的長(zhǎng)軸將其均分為三部分，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各部分主要免疫細(xì)胞的組成。
　　結(jié)果：
　?。?）抗血清可以檢測(cè)人的32kDa和35kDa的顆粒酶B；可用于做western blot、免疫組化法，其最佳使用濃度分別為1:4000、1: