食管癌組織中WISP3基因的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系.pdf

1、授予單位代碼:學(xué)號或申請?zhí)?密級:10459200612027100403009文學(xué)論大位州學(xué)鄭士碩(科學(xué)學(xué)位)食管癌組織中WisP3基因的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系院系名稱:公共衛(wèi)生學(xué)院學(xué)科門類:醫(yī)學(xué)專業(yè)名稱:營養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)作者姓名:陳幕華導(dǎo)師姓名、職稱:陳萍萍副教授謝東教授二零零九年六月十二日鄭州大學(xué)20()9屆碩士學(xué)位論文食管癌組織中wi加3墓因的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系材料與方法1.研究對象的選擇、組織樣本的采集及臨床及病理等相關(guān)因素的

2、收集選取2004年至2007年在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院和林州市腫瘤醫(yī)院就醫(yī)的食管癌患者作為本研究的研究對象，采集患者手術(shù)后食管癌癌組織及其匹配的正常食管組織標(biāo)本186對。所有標(biāo)本均經(jīng)病理學(xué)鑒定。標(biāo)本離體后30分鐘內(nèi)放入液氮中，后轉(zhuǎn)移到一80℃冰箱中保存。收集患者的年齡、性別、腫瘤大小、家族史、腫瘤的位置、腫瘤的分化程度以及患者是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等相關(guān)因素的資料，以用于統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，研究其臨床意義。2.組織中wlsP3m丑NA表達(dá)水平的測定采用

3、熒光定量PCR方法測定食管癌患者癌組織及匹配的癌旁正常組織中wiSP3基因mRNA的表達(dá)水平，以p一actin作為內(nèi)參基因。通過測定樣本中目的基因模板的ct值即循環(huán)閉值來反映模板的含量。對每一個組織樣本，用△Ct(ct們sP3曰C依actin)值表示目的基因與內(nèi)參基因p一actin間Ct的差值，△(△Ct)值等于△Ct(正常食管組織卜一△Ct(食管癌組織)。3.樣本中WISP3蛋白表達(dá)水平的測定通過免疫組織化學(xué)染色法測定186例食管癌患

4、者癌組織及其匹配的癌旁正常組織中WlsP3蛋白表達(dá)水平，每一標(biāo)本在200倍顯微鏡下觀察3個染色最強(qiáng)的視野，并記數(shù)陽性細(xì)胞數(shù)，計(jì)算陽性細(xì)胞百分比，并計(jì)算每位研究對象的食管癌組織中陽性細(xì)胞百分比與匹配的正常食管組織中陽性細(xì)胞百分比的比值，以此比值作為判斷該患者蛋白表達(dá)水平指標(biāo)。4.生存分析資料的收集2008年3月一4月期間，我們對采集標(biāo)本的食管癌患者進(jìn)行跟蹤隨訪。以患者手術(shù)治療時刻作為生存的起始事件，死亡為終點(diǎn)事件，隨訪結(jié)束時間作為觀察終止

5、時間。起始事件與終點(diǎn)事件之間的間隔時間定義為研究對象的生存時間。5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析運(yùn)用SPSS12.o統(tǒng)計(jì)分析軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，采用獷檢驗(yàn)比較186例食管癌患者組織中的wlsP3基因mRNA和蛋白的表達(dá)水平及其與臨床及病理等相關(guān)因素的關(guān)系，繪出wlsP3基因的表達(dá)陽性與陰性的食管癌患者Kaplan一Meier生存曲線，采用時序檢驗(yàn)(fogrank)來比較wlsP3基因的表達(dá)陽性與陰性的兩條曲線的差異。采用比例危險率回歸模型(Cox回歸)分