磷酸化絲裂原蛋白活化激酶P38、腫瘤壞死因子-α、核因子-κBp65與妊娠期高血壓疾病關(guān)系的研究.pdf

1、目的:妊娠期高血壓疾病是妊娠期特有的疾病,是導(dǎo)致孕產(chǎn)婦及圍產(chǎn)兒死亡率升高的主要原因之一,迄今明確的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。目前一般認(rèn)為與血管內(nèi)皮細(xì)胞受損、異常滋養(yǎng)層細(xì)胞侵入子宮肌層、免疫失調(diào)或免疫不匹配等因素密切相關(guān)。其中血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷是妊娠期高血壓疾病病理變化的中心環(huán)節(jié)。磷酸化絲裂原蛋白活化激酶p38(phosphorylatedp38 mitogen-activated protein kinasep,P-p38MAPK)在調(diào)控細(xì)胞

2、因子產(chǎn)生中起著“分子開關(guān)”的作用,其介導(dǎo)中性粒細(xì)胞的炎癥反應(yīng)從而造成血管內(nèi)皮的損傷,影響蛋白合成、細(xì)胞表面受體表達(dá)、細(xì)胞骨架重構(gòu),最終導(dǎo)致細(xì)胞的炎癥、分化和凋亡及多種細(xì)胞反應(yīng)。腫瘤壞死因子-α(tumor necrosisfactor alpha,TNF-α)是一種重要的炎癥介質(zhì)和免疫調(diào)節(jié)因子,具有廣泛的生物學(xué)活性,參與了體內(nèi)許多疾病的病理生理過程。核因子-κB(nuclearfactor-kappaB,NF-κB)是1986年發(fā)現(xiàn)的轉(zhuǎn)

3、錄因子,包括NF-κB/P65及NF-κB/P50,在機(jī)體的免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)及細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育、凋亡等多種生理、病理過程中發(fā)揮重要作用。本文旨在通過研究P-p38MAPK、TNF-α、NF-κBp65在病例-對(duì)照組胎盤組織中的表達(dá)情況及其相關(guān)性,探討其在妊娠期高血壓疾病發(fā)病中的作用,并為臨床治療提供實(shí)驗(yàn)性理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 1選擇2007年9月-2009年9月晚孕期正常孕婦、子癇前期輕度、子癇前期重度患者作為對(duì)

4、照組和研究組(三組均除外患有其他疾病的孕婦)。臨產(chǎn)前行剖宮產(chǎn)術(shù)或經(jīng)陰道順娩的晚孕期正常組孕婦30例,子癇前期輕度組35例,子癇前期重度組35例。胎盤娩出后30分鐘內(nèi)取胎盤母面中央絨毛組織塊約1×1×1cm,避開鈣化區(qū)及壞死區(qū),留取胎盤組織。生理鹽水充分清洗,10％中性福爾馬林溶液固定24小時(shí)以上,常規(guī)石蠟包埋,4 um連續(xù)切片。
　　 2應(yīng)用免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry,IHC)S-P法檢測(cè)胎盤組織中P

5、-p38MAPK、TNF-α、NF-κBp65的表達(dá)強(qiáng)度,根據(jù)細(xì)胞內(nèi)染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞數(shù)分級(jí)。
　　 3應(yīng)用SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,臨床一般資料為計(jì)量資料采用單因素方差分析;計(jì)數(shù)資料采用Kruskal-wallis H檢驗(yàn),Wilcoxon秩和檢驗(yàn)及Fisher's精確概率計(jì)算;兩變量間的相關(guān)分析用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。采用雙側(cè)檢驗(yàn),以P≤0.05為差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性意義,P≤0.01為差異在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有非常顯

6、著性意義。
　　 結(jié)果:
　　 1臨床一般資料比較:各組間年齡、孕周的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 2 P-p38MAPK的表達(dá)
　　 2.1 P-p38MAPK蛋白陽性染色主要位于細(xì)胞核,同時(shí)細(xì)胞質(zhì)也有表達(dá),胎盤絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞(尤其為合體滋養(yǎng)細(xì)胞)及毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞可見P-p38MAPK棕黃色陽性顆粒。依據(jù)前述評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),將細(xì)胞著色分別分為(—～+++)四個(gè)等級(jí)。P-p38MAPK在子癇前期輕

7、度組及子癇前期重度組胎盤中表達(dá)的陽性率分別為80％和94.29％,高于其在對(duì)照組中表達(dá)的陽性率30％,統(tǒng)計(jì)學(xué)上兩者有顯著性差異(P=0.000＜0.05,P=0.000＜0.05)。
　　 2.2 P-p38MAPK在對(duì)照組,子癇前期輕度組及子癇前期重度組三組間均有不同程度的表達(dá),但表達(dá)強(qiáng)度不同,三者相比具有顯著性差異(p=0.000＜0.05)。妊娠期高血壓疾病組胎盤中P-p38MAPK的表達(dá)較對(duì)照組明顯升高,進(jìn)一步兩兩比較:

8、子癇前期輕度組P-p38MAPK的表達(dá)較對(duì)照組明顯升高(P=0.000＜0.05);子癇前期重度組較對(duì)照組明顯升高(p=0.000＜0.05)。且隨疾病加重,P-p38MAPK的表達(dá)逐漸增加:子癇前期重度組P-p38MAPK的表達(dá)較子癇前期輕度組增加(p=0.021＜0.05)。
　　 3 TNF-α的表達(dá)
　　 3.1 TNF-α主要表達(dá)于胞漿和胞膜,胎盤合體滋養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)可見TNF-α棕黃色陽性顆粒,其次還可見于蛻膜細(xì)胞

9、、血管平滑肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和絨毛間質(zhì)細(xì)胞等。TNF-α在子癇前期輕度組胎盤中表達(dá)的陽性率為82.86％,在子癇前期重度組胎盤中表達(dá)的陽性率為97.14％,二者均高于其在對(duì)照組中表達(dá)的陽性率56.67％,統(tǒng)計(jì)學(xué)上兩者有顯著性差異(p=0.029＜0.05,p=0.000＜0.05)。
　　 3.2 TNF-α在對(duì)照組,子癇前期輕度組及子癇前期重度組三組間均有不同程度的表達(dá),但其表達(dá)強(qiáng)度互不相同,三者相比具有顯著性差異(p=0.00

10、0＜0.05)。妊娠期高血壓疾病組胎盤中TNF-α的表達(dá)較對(duì)照組明顯升高,進(jìn)一步兩兩比較:子癇前期輕度組TNF-α的表達(dá)較對(duì)照組明顯升高(p=0.002＜0.05);子癇前期重度組較對(duì)照組明顯升高(p=0.000＜0.05)。且隨疾病加重,TNF-α的表達(dá)逐漸增加:子癇前期重度組TNF-α的表達(dá)較子癇前期輕度組增加(p=0.037＜0.05)。
　　 4 NF-κBp65的表達(dá)
　　 4.1 NF-κBp65在胎盤的合體

11、滋養(yǎng)細(xì)胞、血管內(nèi)皮的細(xì)胞漿和細(xì)胞核中可見NF-κBp65棕黃色陽性顆粒,陽性染色主要位于細(xì)胞核。NF-κBp65在子癇前期輕度組胎盤中表達(dá)的陽性率為80％。NF-kBp65在子癇前期重度組胎盤中表達(dá)的陽性率約為100％,二者均高于其在對(duì)照組中表達(dá)的陽性率33.33％,統(tǒng)計(jì)學(xué)上兩者有顯著性差異(p=0.000＜0.05,p=0.000＜0.05)。
　　 4.2 NF-κBp65在對(duì)照組,子癇前期輕度組及子癇前期重度組三組間均有不

12、同程度的表達(dá),三者相比具有顯著性差異(p=0.000＜0.05)。妊娠期高血壓疾病組胎盤中NF-κBp65的表達(dá)較對(duì)照組明顯升高,進(jìn)一步兩兩比較:子癇前期輕度組NF-κBp65的表達(dá)較對(duì)照組明顯升高(p=0.000＜0.05);子癇前期重度組NF-κBp65的表達(dá)較對(duì)照組明顯升高(p=0.000＜0.05)。且隨疾病加重,NF-κBp65的表達(dá)逐漸增加:子癇前期重度組NF-κBp65的表達(dá)較子癇前期輕度組增加(p=0.019＜0.05)

13、。
　　 5 P-p38MAPK、TNF-α、NF-kBp65三者間的激活程度兩兩互成正相關(guān)(p＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1 P-p38MAPK、TNF-α、NF-kBp65蛋白在正常妊娠對(duì)照組,子癇前期輕度組及子癇前期重度組均有不同程度的表達(dá)。
　　 2 P-p38MAPK、TNF-α、NF-κBp65在對(duì)照組,子癇前期輕度組及子癇前期重度組的表達(dá)程度不同,隨妊娠期高血壓疾病病情進(jìn)展,三者的表

14、達(dá)分別逐漸升高,可能為該病發(fā)病的重要原因
　　 3病理性妊娠患者的胎盤中大量的TNF-α表達(dá),激活p38MAPK,從而形成P-p38MAPK信號(hào)通路,調(diào)控多種細(xì)胞反應(yīng),并刺激更多的炎性因子釋放加重血管內(nèi)皮損傷,并和作為炎癥介質(zhì)和免疫調(diào)節(jié)因子NF-κBp65共同參與妊娠期高血壓疾病發(fā)生及胎盤的病理改變。
　　 4 P-p38MAPK、TNF-α、NF-κBp65兩兩成正相關(guān),三者緊密聯(lián)系,相互影響,共同在妊娠期高血壓疾病中