豬FBXO32與其轉(zhuǎn)錄因子家族的基因克隆、定位、SNP檢測(cè)及與生產(chǎn)性狀的關(guān)聯(lián)分析.pdf

1、泛素－蛋白酶體途徑（UPP）是真核生物細(xì)胞內(nèi)一種高效的蛋白質(zhì)降解途徑，它參與了體內(nèi)許多重要的生物學(xué)功能，包括細(xì)胞周期、肌肉萎縮、抗原遞呈、細(xì)胞凋亡等，尤其是通過(guò)降解細(xì)胞各通路激活因子或抑制因子發(fā)揮上下調(diào)節(jié)的作用。其中由F-box蛋白介導(dǎo)的泛素連接酶E3在底物識(shí)別過(guò)程中起特異識(shí)別的作用，具有調(diào)控UPP的作用。 本文將UPP通路上的FBXO32基因及其轉(zhuǎn)錄因子FoxO基因作為影響豬骨骼肌肌肉生長(zhǎng)發(fā)育的候選基因進(jìn)行研究，通過(guò)對(duì)其克隆、

2、染色體定位、組織表達(dá)譜分析、多態(tài)位點(diǎn)檢測(cè)及與生產(chǎn)性狀的關(guān)聯(lián)分析，為進(jìn)一步研究骨骼肌中蛋白合成與降解的信號(hào)傳導(dǎo)途徑打下基礎(chǔ)，并為將來(lái)應(yīng)用于分子標(biāo)記輔助選擇育種提供初步依據(jù)。主要研究結(jié)果如下： 1．分別依據(jù)人cDNA信息獲得的豬EST所構(gòu)建的EST重疊群設(shè)計(jì)的豬特異引物，從湖北白豬基因組中分離克隆了豬FBXO32、FoxO1、FoxO3a和FoxO4四個(gè)基因的若干個(gè)片段，并提交GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)，獲得了GenBank收錄號(hào)，分別為

3、DQ288235（FBXO32）、AY995235（FBXO32）、DQ243692（FoxO1）、DQ243691（FoxO3a）、DQ288236（FoxO3a）、DQ243693（FoxO4）。 2．分別利用體細(xì)胞雜種板和輻射雜種板技術(shù)對(duì)四個(gè)基因進(jìn)行了染色體定位。結(jié)合兩者結(jié)果表明FOXO32基因定位在豬4p15，與SW835（LOD＝11.49）緊密連鎖，其次和S0301（LOD＝8.98），S0001（LOD＝5.93）

4、連鎖；FoxO1基因定位在豬11p11-15，與SW1632緊密連鎖（LOD＝3.5）；FoxO3a基因定位在豬1p13，與SW301（LOD＝14.72）緊密連鎖，其次和SW781（LOD＝10.08）連鎖；FoxO4基因定位在豬xq13，與SW1835（LOD＝5.9）緊密連鎖。 3．以成年長(zhǎng)白母豬的心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、肌肉、脂肪、舌頭、小腸、胃、胚胎，卵巢和子宮內(nèi)膜組織（共13個(gè)組織）作為研究材料，利用RT-PC

5、R檢測(cè)了豬FBXO32、FoxO1、FoxO3a和FoxO4基因在每個(gè)組織中的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，四個(gè)基因在多數(shù)組織中都表達(dá)。 4．在FBXO32基因中發(fā)現(xiàn)了第5內(nèi)含子的SnaBI—RFLP（C-T）多態(tài)位點(diǎn)；在FoxO3a基因中發(fā)現(xiàn)了第2外顯子的AvaII—RFLP（T-C）多態(tài)位點(diǎn)，該突變位點(diǎn)沒(méi)有引起氨基酸的改變。采用PCR—RFLP分析技術(shù)，利用不同品種豬進(jìn)行基因型檢測(cè)，結(jié)果表明，F(xiàn)BXO32基因在國(guó)內(nèi)品種（大花白、小梅山

6、、通城豬、清平豬）中呈偏態(tài)分布（C等位基因頻率為0）、在大白、杜洛克中具有豐富多態(tài)性；FoxO3a基因除在杜洛克豬中呈偏態(tài)分布（C等位基因頻率為0）外，在其余品種中均具有多態(tài)性。 5．利用SAS 8.2中的廣義線性模型（GLM）程序，以本室與通城縣畜牧局種畜場(chǎng)合作建立的試驗(yàn)群體（含通城、長(zhǎng)白、大白、長(zhǎng)大通和大長(zhǎng)通豬群）為研究對(duì)象，檢測(cè)了FBXO32第5內(nèi)含子SnaBI—RFLP位點(diǎn)的多態(tài)性，分析該基因與部分生產(chǎn)性狀的關(guān)聯(lián)，初步研