神經(jīng)干細(xì)胞生存因子在大鼠脊髓損傷前后的表達(dá).pdf

1、目的：觀察大鼠脊髓損傷后干細(xì)胞來源的神經(jīng)干細(xì)胞生存因子mRNA在大鼠正常和損傷脊髓的表達(dá)變化，探討其在脊髓損傷與修復(fù)過程中可能的生物學(xué)作用。 方法：制備大鼠脊髓損傷模型，采用RT-PCR方法，分析SDNSFmRNA在大鼠脊髓中的表達(dá)及其在損傷前后的表達(dá)表化。利用RT-PCR擴(kuò)增SDNSF基因，克隆至pGEM-T載體，經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄法合成地高辛標(biāo)記的正、反義SDNSFRNA探針。通過原位雜交，觀察SDNSFmRNA在大鼠脊髓中的表達(dá)位

2、置及在損傷脊髓中的表達(dá)變化。應(yīng)用免疫組化的方法，顯示與原位雜交切片相鄰層面脊髓中nestin陽性細(xì)胞，觀察神經(jīng)干細(xì)胞在脊髓損傷后的反應(yīng)，及其與SDNSF表達(dá)的關(guān)系。 結(jié)果：RT-PCR檢測SDNSFmRNA正常大鼠脊髓中有的表達(dá)，在損傷后4d，SDNSFmRNA表達(dá)上升，損傷8d到達(dá)高峰，此后SDNSFmRNA的表達(dá)逐漸減少，到16d恢復(fù)到正常水平；脊髓切片原位雜交結(jié)果發(fā)現(xiàn)SDNSFmRNA陽性細(xì)胞主要分布于脊髓灰質(zhì)細(xì)胞中，可能

3、是神經(jīng)元細(xì)胞，結(jié)果表明正常脊髓可表達(dá)SDNSF；脊髓損傷后8d，原位雜交顯示SDNSF陽性細(xì)胞明顯增多。同時(shí)與此切片相鄰的層面的切片免疫組化證實(shí)nestin陽性細(xì)胞增殖、變大、向周圍發(fā)出突起，但這些陽性細(xì)胞的位置與SDNSF無關(guān)系。 結(jié)論： 1.脊髓損傷后SDNSFmRNA在損傷脊髓中表達(dá)呈動(dòng)態(tài)變化，4d表達(dá)上升，8d達(dá)高峰，12d下降，16d左右基本恢復(fù)正常。SDNSF是一種在脊髓損傷以后表達(dá)發(fā)生變化的基因，主要表達(dá)在