中藥五味子成分的藥代動力學(xué)及代謝研究.pdf

1、中醫(yī)中藥是我國人民與疾病長期斗爭積累的寶貴財富，經(jīng)千百年的臨床驗證，療效肯定，在疾病治療和保健方面具有獨特的優(yōu)勢。隨著人們醫(yī)療保健觀念的轉(zhuǎn)變和“回歸自然”呼聲的提高，中藥的獨特理論和藥理作用引起國際的廣泛關(guān)注和認同，掀起了中藥研究的熱潮。我國是中草藥的故鄉(xiāng)，應(yīng)用歷史悠久，資源豐富，在中醫(yī)中藥的研究中具有得天獨厚的優(yōu)勢。但令人尷尬的是，我國對中草藥的研究與日本、韓國、美國、西歐、港澳臺等國家和地區(qū)相比卻相對滯后。為改變這種局面，近年來國家

2、制定了“中藥現(xiàn)代化發(fā)展戰(zhàn)略”，大力支持和促進我國中藥研究快速發(fā)展，實現(xiàn)與國際接軌，實現(xiàn)中藥的現(xiàn)代化。 中藥藥代動力學(xué)研究是中藥現(xiàn)代化的重要組成部分。借助于動力學(xué)的理論和方法研究中草藥，定量分析中藥中各種化學(xué)成分的相互作用和變化，是中藥現(xiàn)代化的重要途徑，其研究結(jié)果對闡明和揭示中草藥物質(zhì)作用基礎(chǔ)、作用機制及其科學(xué)內(nèi)涵，設(shè)計及優(yōu)選中草藥給藥方案，促進中藥新藥開發(fā)、劑型改進及質(zhì)控具有重要的意義。 五味子是傳統(tǒng)的滋補強壯藥，同時具

3、有顯著的保肝降酶作用，臨床療效確切，目前已有多種五味子成分制劑用于臨床。同其它中藥類似，有關(guān)五味子的藥理作用研究雖開展廣泛，但涉及五味子的藥代動力學(xué)研究相對較少。為進一步闡明五味子的體內(nèi)藥代動力學(xué)規(guī)律，為五味子的臨床合理應(yīng)用提供依據(jù)，同時積極探索中藥藥代動力學(xué)研究方法，本課題在已有研究基礎(chǔ)上結(jié)合最近中藥藥代動力學(xué)研究涌現(xiàn)出的新特點和新趨勢，對五味子開展了以下幾方面的藥代動力學(xué)探索研究：1.建立高效、快速、準(zhǔn)確可靠的五味子四種有效木脂素成

4、分體內(nèi)分析方法，研究其在正常和病理狀態(tài)下的藥代動力學(xué)特征；2.病理狀態(tài)下五味子多種成分的藥代—藥效動力學(xué)相關(guān)性：3.建立五味子提取物化學(xué)指紋圖譜、微粒體溫孵指紋圖譜、體內(nèi)藥代和藥效指紋圖譜，并對其進行分析比較；4.應(yīng)用體外肝微粒體溫孵、PCR、Westernblot、Caco—2細胞等方法和模型研究五味子成分與藥物代謝酶/藥物外排蛋白P—gp的相互作用；5.應(yīng)用整體動物研究五味子成分與其它臨床藥物聯(lián)合應(yīng)用的藥代動力學(xué)相互作用。

5、研究結(jié)果表明： 一、五味子提取物中四種木脂素的藥代動力學(xué)及藥效動力學(xué)研究。 1.1 本研究建立的生物樣品中五味子醇甲、酯甲、甲素和乙素四種木脂素的HPLC—MS定量分析方法專屬性強、靈敏度高、操作簡便，適用于四種五味子有效木脂素體內(nèi)藥代動力學(xué)研究。 1.2 正常大鼠口服五味子醇提物后，五味子醇甲、酯甲、甲素和乙素四種成分吸收較快，給藥后0.25h四種木脂素的血藥濃度均較高，達峰時間約為6—8h，體內(nèi)平均滯留時間約

6、為10h，四種成分中五味子醇甲AUC值最大，乙素最小。 1.3 急性肝損傷大鼠口服五味子醇提物后，四種成分的血藥濃度均高于正常對照組，Cmax．AUC、Tmax和MRT等參數(shù)均明顯提高或延長，而CLz/F顯著降低，提示四種木脂素在ALI大鼠中吸收增加，而代謝消除減慢，藥代動力學(xué)出現(xiàn)明顯改變。ALI大鼠體內(nèi)參與四種成分代謝的肝臟CYP450同工酶活性降低是引起此改變的主要原因。 1.4 肝損傷大鼠體內(nèi)五味子醇甲、酯甲、甲素

7、和乙素四種有效成分的藥代動力學(xué)與血清ALT水平隨時間變化存在一定聯(lián)系，體現(xiàn)五味子成分藥代動力學(xué)(PK)與藥效動力學(xué)(PD)的相關(guān)性。 二、五味子提取物指紋圖譜研究。 2.1 應(yīng)用HPLC—UV—MS分析方法初步獲得五味子提取物化學(xué)指紋圖譜、微粒體中溫孵指紋圖譜、體內(nèi)藥代和藥效指紋圖譜：五味子水提物化學(xué)指紋圖譜中成分較少，含量較低，在微粒體溫孵時較穩(wěn)定，不易生成代謝產(chǎn)物；五味子醇提物化學(xué)指紋圖譜成分較多且含量較高，在微粒體

8、溫孵可生成代謝產(chǎn)物；五味子醇提物化學(xué)指紋圖譜中多種成分可進入體內(nèi)藥代和藥效指紋中，是五味子成分多種藥理作用物質(zhì)作用基礎(chǔ)的體現(xiàn)，同時為后續(xù)的五味子胃腸道代謝吸收、單一成分與提取物或復(fù)方中多成分作用差異等研究提供了有力信息；五味子醇提物體內(nèi)藥代和藥效指紋中含有多種代謝產(chǎn)物，包含五味子成分作用機制和代謝轉(zhuǎn)化信息。 2.2 五味子醇提物化學(xué)、微粒體溫孵、藥代和藥效四種指紋圖譜中均含有五味子醇甲、酯甲、甲素和乙素四種成分，且含量較高，提示

9、醇提物中上述四種木脂素均較易吸收入體內(nèi)，因此五味子醇甲、酯甲、甲素和乙素可作為研究五味子醇提物或相關(guān)制劑“體內(nèi)暴露”的“PKMarker”；四種木脂素在微粒體和體內(nèi)均能找到2個基本一致的代謝物即7，8—dihydroxy—schizandrin和分子量為432的另一代謝物，二者可作為五味子醇提物或相關(guān)制劑的“DMMarker”。 三、五味子成分對肝臟藥物代謝酶/藥物外排蛋白P—gp的影響。 3.1 五味子醇提物多次給藥(

10、1.5g/Kg，qd×7d)對CYP2E1/3A酶活性、CYP2B/3A的mRNA和CYP2E1/3A蛋白表達具有一定的誘導(dǎo)作用，對CYP2C/2D酶活性具有一定抑制作用；此外，五味子醇提物(28—120μg/mL)在體外對CYP450同工酶有抑制作用。 3.2 五味子水提物多次給藥(1.5g/Kg，qd×7d)對CYP2E1活性、CYP2C/3A的mRNA和CYP2E1/3A的蛋白表達具有一定的誘導(dǎo)作用，對CYP2D酶活性和m

11、RNA表達具有抑制作用；五味子水提物(100-500μg/mL)在體外對CYP450同工酶亦有抑制作用。 3.3 Caco—2細胞Transwell轉(zhuǎn)運實驗結(jié)果表明，五味子醇甲、酯甲、甲素和乙素四種木脂素中，五味子甲素可能是P—gp的底物；五味子醇/水提物和四種木脂素成分對P—gp均有不同程度的抑制作用，其中五味子醇/水取物、五味子甲素和乙素抑制作用較強，五味子醇甲和酯甲的抑制作用較弱。 四、五味子成分與其它藥物合用的藥

12、代動力學(xué)的相互作用。 4.1 五味子醇提物多次給藥后，五味子醇甲、酯甲、甲素和乙素四種木脂素成分AUC和MRT均明顯降低，體內(nèi)代謝消除加快，說明五味子成分多次給藥可通過誘導(dǎo)CYP450酶而加速自身木脂素類成分的體內(nèi)代謝。 4.2 五味子醇提物單次和多次給藥對CYP2D均有較明顯的抑制作用，而CYP2D是參與抗抑郁藥舍曲林代謝的同工酶之一，因此對二者合用的藥代動力學(xué)相互作用進行了研究。結(jié)果表明，五味子醇提物單次和多次給藥對

13、舍曲林體內(nèi)代謝有抑制的趨勢，但總體無明顯影響，該結(jié)果可能與多個同工酶(CYP286，CYP2C9，CYP2C19，CYP2D6，CYP3A4)參與舍曲林代謝有關(guān)。臨床上五味子醇提物成分與經(jīng)CYP2D代謝藥物合用時仍需注意相互作用的潛在可能。 4.3 氯唑沙宗是中樞性肌肉松弛劑，在體內(nèi)主要經(jīng)CYP2E1代謝，而五味子醇提物多次給藥和體外實驗表明對CYP2E1有顯著誘導(dǎo)和抑制作用，因此在整體動物研究了二者藥代動力學(xué)相互作用，結(jié)果表明

14、，五味子醇提物單次給藥對氯唑沙宗藥代動力學(xué)無明顯影響，而多次給藥可在一定程度上誘導(dǎo)氯唑沙宗的代謝，提示五味子醇提物單次給藥對CYP2E1的抑制作用在整體上表現(xiàn)不明顯，多次給藥可能通過誘導(dǎo)CYP2E1酶活和蛋白表達而加快氯唑沙宗的體內(nèi)代謝。因此，當(dāng)五味子醇提物成分與主要經(jīng)CYP2E1代謝的藥物長期合用時，應(yīng)注意適當(dāng)增加該藥物給藥量，以防止藥效降低。 4.4 新型免疫抑制劑他克莫司在體內(nèi)多經(jīng)肝臟CYP3A代謝，該藥治療窗較窄，臨床應(yīng)

15、用時需作血藥濃度監(jiān)測。據(jù)報道，肝移植病人常將他克莫司和五味子制劑合用，而五味子醇提物對CYP3A有誘導(dǎo)/抑制作用，二者合用極可能發(fā)生相互作用，導(dǎo)致藥效降低，發(fā)生器官排斥或不良反應(yīng)。本研究結(jié)果表明，五味子醇提物單次和多次給藥可明顯升高他克莫司血藥濃度(峰濃度升高約10倍，AUC升高7—12倍)，增加不良反應(yīng)發(fā)生率。為避免不良反應(yīng)發(fā)生，兩藥合用時，應(yīng)根據(jù)實際情況適當(dāng)減少他克莫司給藥量。此外，已知常用口服藥物在體內(nèi)大部分經(jīng)CYP3A代謝，而C