苯丙氨酸二肽類化合物Y101抗乙肝病毒機制研究.pdf

1、目的：研究苯丙氨酸二肽類化合物 Y101（Phenylalanine dipetide compounds Y101,PDCY101）體外抗乙肝病毒作用和對免疫功能的影響，并探討其作用機制。方法：1.體外實驗（1）Y101對2.2.15細胞的毒性實驗：用24孔板接種2.2.15細胞48小時后，加5種不同濃度Y101藥液（100、75、50、25、12.5μg/ml）,每4天換一次藥液，維持8天，用顯微鏡觀察細胞病變，計算其半數細胞毒濃度

2、（TC50）和最大無毒濃度（TC0）；（2）在Y101無毒濃度以下（50μg/ml），設50、25、12.5μg/ml3個濃度組、拉米夫定陽性對照組（50μg/ml）和2.2.15細胞對照組，分別收集給藥4天、8天及停藥4天的細胞和培養(yǎng)液，酶聯(lián)免疫法（ELISA）測定培養(yǎng)液中HBeAg和HBsAg的含量；（3）普通PCR定性檢測Y101對2.2.15細胞中HBV-DNA和cccDNA表達量的影響，實時熒光定量PCR準確檢測各組2.2.1

3、5細胞中所提取的HBV-DNA和cccDNA含量；（4）3H同位素標記法研究體外Y101對鴨乙型肝炎DNA多聚酶（DHBV RCs DNAP）的抑制效果。2.體內實驗（1）采用碳廓清試驗和血清溶血素試驗，觀察Y101對正常Balb/C小鼠的非特異性免疫的影響以及對正常昆明小鼠體液免疫的影響。
　　結果：1.體外實驗（1）Y101對2.2.15細胞半數細胞毒濃度（TC50）為79.44μg/ml，最大無毒濃度（TC0）為50μg/m

4、l。（2）與1％DMSO細胞對照組相比，Y101（50μg/ml）對HBsAg具有一定的抑制作用，在給藥4天、8天和停藥4天的平均抑制率分別為31.80%、47.09%、40.08%；對HBeAg抑制率相對較低，給藥4天、8天和停藥4天的平均抑制率分別為5.76%、20.98%、3.61%；（3）Y101（50μg/ml、25μg/ml）對2.2.15細胞內HBV DNA和cccDNA的表達具有不同程度的抑制作用，在細胞培養(yǎng)的8天高劑量

5、組（50μg/ml）的抑制作用達到最大，HBV DNA和cccDNA的平均抑制率分別為83.4%和75.8%，且在停藥后4天仍保持較高的抑制率。（4）Y101對鴨乙型肝炎DNA多聚酶（DHBV RCs DNAP）無抑制作用，陽性對照藥磷甲酸鈉（PFA）對DHBV RCs DNAP的IC50為1.27μM。2.體內實驗（1）巨噬細胞吞噬功能試驗，與正常組相比，Y101（100mg/kg）具有提高正常小鼠吞噬指數（α）的作用（P<0.05）

6、；（2）血清溶血素實驗，與模型組相比，Y101（100mg/kg、50mg/kg）能夠顯著提高小鼠血清溶血素水平（P<0.01），并可以增加脾臟、胸腺等免疫器官的重量（P<0.01）。
　　結論：（1）Y101明顯抑制2.2.15細胞HBsAg和HBeAg的分泌和細胞內HBV DNA和cccDNA的表達，表明其具有一定的抗乙肝病毒的活性。（2）Y101抗乙肝病毒的作用不是通過抑制DNA聚合酶，而可能是通過直接抑制細胞內cccDNA