n-3HUFA對西伯利亞鱘親魚繁殖力及子代發(fā)育和脂肪代謝的影響.pdf

1、西伯利亞鱘(Acipenser baeri Brandt)屬鱘形目(Acipenseriforme)，鱘科，是一類古老的軟骨硬鱗魚類，在魚類進(jìn)化史上占有重要地位，有活化石之稱。同時(shí)也是我國重要的經(jīng)濟(jì)魚類養(yǎng)殖品種，產(chǎn)量居世界之首。本研究分別以西伯利亞鱘親魚及仔稚魚作為試驗(yàn)對象，研究飼料中n-3HUFA水平對親魚繁殖性能、脂肪代謝、仔稚魚質(zhì)量的影響以及飼料中不同DHA/EPA比例對仔魚早期生長發(fā)育、脂肪代謝及抗氧化能力的影響，并探索通過開口

2、期營養(yǎng)規(guī)劃來改善其對低n-3HUFA飼料的利用能力的可能性。本研究內(nèi)容共分為以下四個(gè)部分，分別摘要如下:
　　試驗(yàn)一:西伯利亞鱘PPARα、LPL和HL基因全長cDNA克隆與序列分析
　　本試驗(yàn)通過反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)和cDNA末端快速擴(kuò)增(RACE)技術(shù)克隆西伯利亞鱘（Acipenser bαerii）肝臟中過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPARα)、脂蛋白酯酶(LPL)、肝酯酶(HL）基因全長cDNA序列

3、。結(jié)果顯示:西伯利亞鱘肝臟中PPARα基因(GenBank登錄號(hào)KJ534588) cDNA全長1736 bp，包括158 bp的5'非翻譯區(qū)、1401 bp的開放閱讀框及177 bp的3'非翻譯區(qū);開放閱讀框編碼1個(gè)由466個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)，預(yù)測其分子質(zhì)量為52.3 ku，與其他物種的相似性為75.5％～82.4％; LPL基因（GenBank登錄號(hào)KJ720972）cDNA全長1760 bp，包括163 bp的5'非翻譯區(qū)、15

4、06 bp的開放閱讀框及91bp的3'非翻譯區(qū);開放閱讀框編碼1個(gè)由501個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)，預(yù)測分子質(zhì)量為57.1ku，與其他物種的相似性為48.7％～67.0％;HL基因（GenBank登錄號(hào)KJ720973）cDNA全長1740 bp，包括124bp的5'非翻譯區(qū)、1500 bp的開放閱讀框及116 bp的3'非翻譯區(qū);開放閱讀框編碼1個(gè)由499個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)，預(yù)測分子質(zhì)量為56.4 ku，與其他物種的相似性為55.4％～

5、67.1％。通過構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹發(fā)現(xiàn)，西伯利亞鱘PPARα與高等脊椎動(dòng)物的親緣關(guān)系較近，LPL、HL與魚類親緣較近。本試驗(yàn)通過對西伯利亞鱘PPARα、HL、LPL基因同源性、系統(tǒng)進(jìn)化地位的分析，為進(jìn)一步研究西伯利亞鱘脂肪代謝調(diào)控機(jī)制奠定了分子生物學(xué)基礎(chǔ)。
　　試驗(yàn)二:n-3HUFA對西伯利亞鱘親魚繁殖力及其子代生長發(fā)育的影響
　　本試驗(yàn)設(shè)計(jì)兩種等氮等能的膨化沉性飼料，n-3HUFA的含量分別為2.95％和1.79％，分別命

6、名為H組和L組。分別飼喂雌雄兩種性別的西伯利亞鱘親本，試驗(yàn)周期11個(gè)月。在繁殖期間，記錄親本繁殖性能指標(biāo)，并分別取不同親本來源的仔稚魚統(tǒng)計(jì)開口期存活率;仔稚魚根據(jù)親本來源分為D1（H♀×H♂）、D2（H♀×L♂）、D3（L♀×H♂）、D4（L♀×L♂）4個(gè)處理組，每個(gè)處理組3個(gè)重復(fù)，并記錄仔稚魚期間生長、存活狀況。試驗(yàn)結(jié)果表明:H組雌性親本的相對懷卵率、卵重均高于L組，但未達(dá)到顯著水平(P＞0.05);H組魚卵中n-3HUFA含量顯著高

7、于L組并且H組卵徑顯著高于L組(P＜0.05);H組中雄性親本精子平均曲線運(yùn)動(dòng)速度(VCL)、平均直線運(yùn)動(dòng)速度(VSL)均顯著高于L組(P＜0.05)，精子活率高于L組但未達(dá)到顯著水平，精液密度、平均路徑運(yùn)動(dòng)速度(VAp)、精子平均側(cè)擺幅值(ALH)、精子平均打鞭頻率(BCF)、精子平均移動(dòng)角度(MAD)均無顯著性差異(P＞0.05)。H組親魚血清中TC的含量H組與L組差異不顯著(P＞0.05)，TG含量顯著低于L組(P＜0.05)，血

8、清中HDL水平與L組差異不顯著(P＞0.05)，LDL顯著低于L組(P＜0.05)。血清中MDA的濃度試驗(yàn)組顯著低于L組(P＜0.05)，SOD和T-AOC顯著高于L組(P＜0.05)。仔稚魚D1組和D2組7日齡存活率、30日齡存活率均顯著高于D3組和D4組(P＜0.05); D4組的特定生長率以及終末均重在各組中最低，且顯著低于D2組(P＜0.05)，其他各組之間差異并不顯著(P＞0.05)。以上試驗(yàn)結(jié)果說明:n-3HUFA可以顯著影

9、響西伯利亞鱘雙親的繁殖性能及其仔稚魚的存活。同時(shí)，對西伯利亞鱘親魚脂肪代謝存在積極作用并可以顯著提高其抗氧化能力。
　　試驗(yàn)三:微顆粒飼料中DHA/EPA對西伯利亞鱘仔稚魚生長、脂肪代謝及抗氧化性能的影響
　　本試驗(yàn)的主要目的是研究飼料DHA/EPA對西伯利亞鱘仔稚魚生長、脂肪代謝及抗氧化性能的影響。將西伯利亞鱘仔魚以800尾/桶的密度隨機(jī)投放于12個(gè)循環(huán)水養(yǎng)殖桶中，隨機(jī)分成4個(gè)處理組，每個(gè)處理組3個(gè)重復(fù)，不同處理分別投喂D

10、HA/EPA比例為1.33∶1（R1.33組）、1.86∶1(R1.86組)、2.25∶1（R2.25組）、2.75∶1（R2.75組）的4種等氮等能的微顆粒飼料，實(shí)驗(yàn)周期為32d。試驗(yàn)結(jié)果表明:R2.75組西伯利亞鱘仔稚魚體長、終末均重、凈增重、特定生長率均顯著高于其他三組（P＜0.05）;臟體比、肥滿度及存活率各組之間沒有顯著性差異;R2.25組和R2.75組稚魚全魚CAT活性顯著高于R1.33組和R1.86組。SOD、T-AOC和

11、MDA各組之間沒有顯著性差異(P＞0.05)。TCH、TG、HDL、LDL各組之間均沒有顯著性差異(P＞0.05)。內(nèi)臟團(tuán)PPARα、LPL的表達(dá)量各組之間差異不顯著，但R2.25組和R2.75組中HL的表達(dá)量顯著高于R1.33組(P＜0.05)。以上結(jié)果表明:飼料中DHA/EPA為2.75時(shí)，西伯利亞鱘仔魚的生長效果最佳;飼料中DHA/EPA比例可以顯著改善西伯利亞鱘鱘仔稚魚魚體中脂肪酸組成，并對其抗氧化能力的提升有一定的影響，但是對

12、西伯利亞鱘仔稚魚早期脂肪代謝影響并不顯著。
　　試驗(yàn)四:早期低n-3HUFA刺激對西伯利亞鱘仔稚魚生長、脂肪代謝及抗氧化的影響
　　本試驗(yàn)基于早期營養(yǎng)規(guī)劃理論，探索早期低n-3HUFA刺激對西伯利亞鱘仔魚生長及后期抗氧化、脂肪代謝的影響。試驗(yàn)分成兩組，H組飼喂n-3HUFA水平為2.32％的微顆粒飼料，L組飼喂n-3HUFA為n-3HUFA水平為0.54％的微顆粒飼料，兩組飼喂至仔魚32日齡后，分別采用n-3HUFA水平為2

13、.02％和0.27％的飼料飼喂33-55日齡和56-77日齡階段。試驗(yàn)結(jié)果表明:L組在32日齡的末均重及特定生長率均顯著低于飼喂高HUFA的H組(P＜0.05)，存活率兩組之間并無顯著性差異(P＞0.05)。然而在對兩組仔魚飼喂同一種n-3HUFA含量適宜的飼料后(33～55日齡)，L組的特定生長率和增重率均高于了H組，但末均重還是顯著低于H組。在飼喂低n-3HUFA飼料后（56-77日齡），L組的增重率和特定生生長率與H組無顯著差異，

14、H組末均重顯著高于L組(P＜0.05)。32、77日齡仔魚內(nèi)臟團(tuán)組織勻漿液中抗氧化指標(biāo)兩組之間均無差異顯著性(P＞0.05)。77日齡魚體脂肪酸組成中L組DHA、EPA及n-3HUFA總量均顯著低于H組(P＜0.05)。18日齡，H組仔魚內(nèi)臟團(tuán)中PPARα、HL、LPL基因表達(dá)量均顯著高于L組;32日齡，H組仔魚內(nèi)臟團(tuán)中LPL基因表達(dá)量均顯著高于L組，PPARα、HL表達(dá)量兩組之間差異不顯著;77日齡，PPARα、HL、LPL在肝臟中的