平歐雜交榛莖段與胚培養(yǎng)技術(shù)體系的研究.pdf

1、榛子是北方生態(tài)經(jīng)濟(jì)林建設(shè)的重要樹(shù)種，平榛與歐榛雜交品種因其堅(jiān)果大，抗寒性強(qiáng)而得到發(fā)展。但壓條繁殖系數(shù)低，無(wú)法滿(mǎn)足生產(chǎn)需求。所以，通過(guò)組織培養(yǎng)實(shí)現(xiàn)快速繁殖具有重要意義，重點(diǎn)是建立平歐雜交榛莖段組織培養(yǎng)及胚離體培養(yǎng)技術(shù)體系。莖段培養(yǎng)著重探討外植體取材時(shí)期，基本培養(yǎng)基篩選，不同榛子品種(品系)基因型間差異及莖段培養(yǎng)啟動(dòng)、增殖、生根整個(gè)過(guò)程中各環(huán)節(jié)的最佳培養(yǎng)基配方。幼胚離體培養(yǎng)重點(diǎn)研究體細(xì)胞胚發(fā)生過(guò)程中愈傷組織誘導(dǎo)和胚狀體誘導(dǎo)階段的最佳培養(yǎng)基篩

2、選，同時(shí)利用石蠟切片法對(duì)胚狀體的發(fā)生發(fā)育過(guò)程進(jìn)行了組織細(xì)胞學(xué)觀(guān)察，并對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)和增殖過(guò)程中的褐變機(jī)理、防止褐變措施作一初步探索。結(jié)果表明： 1.莖段培養(yǎng)取材的較好時(shí)期為5月中旬，污染率低、萌芽率高。2.平歐雜交榛不同基因型間的萌芽率及芽苗生長(zhǎng)狀態(tài)存在極顯著差異，其中早熟品種魁香組培效果較好，萌芽率最高，為68.67％，腋芽萌發(fā)早、健壯、生長(zhǎng)快。 3.基本培養(yǎng)基為DKW培養(yǎng)基；增殖階段較好的培養(yǎng)基為：DKW+TDZ1.

3、5mg/L+IBA0.01mg/L；生根培養(yǎng)較佳培養(yǎng)基為：1/2MS+NAA0.1mg/L，生根率達(dá)90％。試管苗移栽于蛭石：草炭(1：1)基質(zhì)中，成活率達(dá)到90％以上。 4.平歐雜交榛愈傷組織誘導(dǎo)受品種間影響很小，胚性愈傷組織誘導(dǎo)的適宜培養(yǎng)基為MS+KT0.5mg/L+NAA0.2mg/L+2,4-D0.5mg/L和MS+KT1.0mg/L+NAA0.5mg/L+2,4-D0.2mg/L；胚狀體誘導(dǎo)的適宜培養(yǎng)基為MS+BA1.

4、0mg/L+NAA0.5mg/L。 5.切片觀(guān)察表明，平歐雜交榛胚狀體的發(fā)生，起源于胚性愈傷組織表面或內(nèi)部的單個(gè)胚性細(xì)胞。胚性細(xì)胞歷經(jīng)多細(xì)胞胚、球形胚、心形胚、子葉胚，最后發(fā)育成熟，發(fā)育過(guò)程與合子胚相似。 6.通過(guò)研究平歐雜交榛胚培養(yǎng)過(guò)程中愈傷組織過(guò)氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO)的活性，結(jié)果表明，在榛子愈傷組織培養(yǎng)過(guò)程中多酚氧化酶(PPO)的活性與培養(yǎng)材料的褐變程度有一定的相關(guān)性，酶活性高，愈傷組織褐變嚴(yán)重。而