豬鏈球菌2型甘油醛脫氫酶的基因檢測(cè)及其黏附作用.pdf

1、根據(jù)已發(fā)表的豬鏈球菌2型(SS2)3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)基因序列，設(shè)計(jì)合成一對(duì)引物，對(duì)包括豬鏈球菌2型的39株鏈球菌gapdh進(jìn)行檢測(cè)，各種鏈球菌均能檢出此基因，得到預(yù)期的1040bp的PCR產(chǎn)物，僅無毒株T15未檢出。對(duì)HA9801、ZY05719株的gapdh測(cè)序，登錄GenBank。經(jīng)BLAST比對(duì)和DNAStar軟件分析，2株菌的gapdh與GenBank中已發(fā)表的SS2的gapdh同源性為99.9％、99.8％。g

2、apdh在鏈球菌中廣泛存在，并高度同源。對(duì)豬鏈球菌2型四川分離株ZY05719的gapdh全基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增， 并將此基因定向克隆至原核表達(dá)載體pET-32a(+)中，構(gòu)建了表達(dá)載體pET-32a-GAPDH。利用大腸桿菌BL21成功表達(dá)了58kD的GAPDH融合蛋白，并利用Novagen公司的His-Bind Purification Kit(70239-3)純化出GAPDH蛋白。利用HEp-2細(xì)胞對(duì)GAPDH的黏附特性進(jìn)行研究。

3、ZY05719(GAPDH<'+>)和T15(GAPDH<'->)雖均能黏附于HEp-2細(xì)胞，但GAPDH<'+>菌株的黏附菌數(shù)顯著高于GAPDH<'->株(P＜0.05)。純化的原核表達(dá)的GAPDH融合蛋白能顯著降低GAPDH<'+>株的黏附菌數(shù)(P＜0.05)，但不能阻斷。對(duì)GAPDH<'->株無抑制作用。證明利用原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的GAPDH具有黏附作用?；谪i鏈球菌2型(SS2)通過其胞外蛋白酶裂解豬流感病毒血凝素(HA)的假設(shè)，