Three Dimensional Structure of 2A Protenaise from Enterovirus 71.pdf

1、腸道病毒71型(Enterovirus-71，EV-71)屬于小核糖核酸病毒科。EV-71是手足口病(Hand，footandmouthdisease，HFMD)的主要病因，也能導(dǎo)致干細(xì)胞腦炎和其他中樞神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥(centralnervoussystemcomplications，CNS)，最終可能在兒童中引起致命的結(jié)果。目前還沒有能有效預(yù)防和治療EV-71感染的疫苗或抗病毒藥物。EV-71的基因組只有一個(gè)大的開放閱讀框，編碼一個(gè)多

2、聚蛋白前體。對(duì)這個(gè)多聚蛋白前體進(jìn)行切割產(chǎn)生的功能性蛋白對(duì)病毒的復(fù)制有重要作用。這些切割是由兩個(gè)病毒蛋白酶介導(dǎo)的，這兩個(gè)酶分別叫做2A蛋白酶(2Apro)和3C蛋白酶(3Cpr)。2Apro能夠從非結(jié)構(gòu)蛋白中切出結(jié)構(gòu)性蛋白，另外，此蛋白酶也能切割真核翻譯起始因子4G(eukaryotictranslationinitiationfactor4G，eIF4G)及其他宿主因子。因?yàn)榫哂袉我坏慕Y(jié)構(gòu)和功能特征，所以2Apro被認(rèn)為是抵抗EV-71

3、病毒的一個(gè)優(yōu)良靶點(diǎn)。因此，解析這個(gè)蛋白酶的結(jié)構(gòu)具有重要意義。本文中，我們?cè)?.70(A)的分辨率下解出了一顆EV-71病毒2Apro晶體的三維結(jié)構(gòu)。我們首先將2Apro構(gòu)建到pGEX-4T-1載體中并在E.coli中得到了高產(chǎn)量表達(dá)的帶GST標(biāo)簽的融合蛋白。使用親和層析技術(shù)純化融合蛋白后，利用凝血酶thrombin切除GST標(biāo)簽，進(jìn)一步使用凝膠過濾層析技術(shù)純化得到了重組蛋白。在篩選了大約1000多個(gè)結(jié)晶條件并對(duì)有效條件進(jìn)行了進(jìn)一步優(yōu)化后