重組Ag85A DNA的克隆與表達(dá).pdf

1、 Ag85復(fù)合體屬于纖維連接素結(jié)合蛋白家族，最新研究發(fā)現(xiàn)這些蛋白質(zhì)具有分枝酰轉(zhuǎn)移酶活性，參與海藻糖索狀因子的發(fā)生，可能在細(xì)菌細(xì)胞壁的合成中起作用，是維持細(xì)菌細(xì)胞壁完整性的重要結(jié)構(gòu)。Ag85復(fù)合體蛋白由Ag85A，Ag85B和Ag85C組成，其中Ag85A和Ag85B較Ag85C具有重要的生物學(xué)效應(yīng)。Ag85A蛋白表達(dá)于結(jié)核分枝桿菌和牛分枝桿菌的培養(yǎng)濾液中，由于結(jié)核分枝桿菌生長(zhǎng)緩慢，并且需要較復(fù)雜生長(zhǎng)條件，從細(xì)菌菌體中提取Ag85A

2、蛋白易發(fā)生凝集和降解，更難于純化。因此，在很大程度上限制了此蛋白在血清學(xué)診斷、基礎(chǔ)免疫學(xué)研究和疫苗制備等各領(lǐng)域中的應(yīng)用。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，Ag85復(fù)合體，特別是Ag85A具有刺激細(xì)胞免疫功能增強(qiáng)作用。因此，人們?cè)噲D將其開發(fā)成疫苗類制劑，用于分枝桿菌引起的疾病及惡性腫瘤的防治。 DNA基因克隆技術(shù)的建立與應(yīng)用，為Ag85A DNA疫苗及Ag85A蛋白分子的制備和應(yīng)用提供了可行性。為此，本文選擇在大腸桿菌內(nèi)具有高表達(dá)能力的pTrcH