血清和糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)蛋白激酶在腎細胞中的定位及其與醛糖還原酶關(guān)系的研究.pdf

1、血清和糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)蛋白激酶(serum and glucocorticoid inducible proteinkinase，SGK)是一種新發(fā)現(xiàn)的絲/蘇氨酸蛋白激酶，與其他蛋白激酶主要在酶活性水平上受翻譯后的磷酸化和去磷酸化調(diào)控顯著不同的是，SGK1的轉(zhuǎn)錄、活性以及亞細胞定位受到不同胞內(nèi)和胞外刺激因素的調(diào)節(jié)，是多種胞內(nèi)信號途徑的功能性交匯點，參與了細胞增殖、滲透調(diào)節(jié)、離子通道調(diào)節(jié)以及細胞生存和/或凋亡應(yīng)答等過程，與糖尿病腎病、高血壓

2、等疾病密切相關(guān)。 然而，SGK1在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的分子機制還不是很清楚，其底物的發(fā)現(xiàn)也很有限。尤其SGK1的亞細胞定位研究仍存在很多爭議，在細胞內(nèi)表達外源的SGK1與細胞內(nèi)源表達的SGK1的亞細胞定位也存在差異。因此，SGK1的亞細胞定位仍是值得深入探討的問題，研究SGK1的亞細胞定位有利于進一步研究SGK1的底物以及其在各種細胞活動中所擔(dān)任的角色和作用機制。在本文的研究中，我們通過免疫細胞化學(xué)，western blot，以及基

3、因沉默(RNAi)等技術(shù)檢測了小鼠腎內(nèi)髓質(zhì)集合管上皮細胞(mouse inner medullary collecting duct，mIMCD3)中內(nèi)源表達的SGK1的亞細胞定位情況，同時構(gòu)建了帶有Flag標簽的SGK1表達載體sgk1-Flag-pCMV5，通過免疫細胞化學(xué)和核漿分離等技術(shù)檢測了外源SGK1在mIMCD3細胞中的分布情況。結(jié)果證明了在mIMCD3細胞中內(nèi)源表達的SGK1定位于細胞核中，外源表達的SGK1在細胞質(zhì)和細胞

4、核都有分布，然主要還是分布于細胞核中。并且，我們發(fā)現(xiàn)了在mIMCD3細胞中，高鹽培養(yǎng)環(huán)境可誘導(dǎo)SGK1的高表達。 醛糖還原酶(aldose redutase，AR)作為多元醇糖代謝通路中的限速酶，在糖尿病腎病中起著重要作用。近幾年來的研究也證實SGK1參與了糖尿病腎病的發(fā)生。然而，關(guān)于AR與SGK1之間是否存在關(guān)系的研究迄今仍未見報道。我們利用AR的化學(xué)酶抑制劑(zopolrestat，ARI)和AR siRNA，通過免疫細胞化