轉(zhuǎn)基因棉花材料獲得及主要農(nóng)藝性狀變異分析.pdf

1、隨著植物基因工程的發(fā)展，人們已成功地將抗蟲基因?qū)朊藁ǎ⒂闪嗽S多抗蟲棉花品種。棉花在遺傳轉(zhuǎn)化過程中產(chǎn)生了一些可以穩(wěn)定遺傳的變異，豐富了棉花的遺傳資源，對(duì)這些材料進(jìn)行全面系統(tǒng)的分析具有很重要的意義。本實(shí)驗(yàn)室在規(guī)?；D(zhuǎn)基因過程中，通過花粉管通道法和農(nóng)桿菌介導(dǎo)法獲得了大批的變異材料，在田間農(nóng)藝性狀穩(wěn)定，為轉(zhuǎn)基因變異規(guī)律的研究提供了材料基礎(chǔ)。對(duì)穩(wěn)定的轉(zhuǎn)基因變異材料進(jìn)行全面系統(tǒng)的調(diào)查分析，為功能基因的研究提供一定的理論基礎(chǔ)。 本實(shí)驗(yàn)通

2、過花粉管通道法和農(nóng)桿菌介導(dǎo)法對(duì)三種抗蟲基因(單價(jià)抗蟲基因(SCK)、雙價(jià)抗蟲基因(Bt+CpTI)和三價(jià)抗蟲基因(Bt+CpTI+GNA))進(jìn)行了遺傳轉(zhuǎn)化，并對(duì)轉(zhuǎn)基因植株T1代進(jìn)行了田間卡那霉素鑒定和生物鑒定。同時(shí)測(cè)定了苗期Bt毒蛋白含量，對(duì)以上鑒定呈陽性的材料進(jìn)行PCR檢測(cè)，選擇有目的基因插入的單株，從中篩選出一批抗蟲的變異材料。 研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同目地基因?qū)D(zhuǎn)化率的影響不大。對(duì)不同世代的Bt毒蛋白的表達(dá)穩(wěn)定性進(jìn)行了分析，結(jié)果

3、顯示，T3和T5代的毒蛋白含量要高于T1代，轉(zhuǎn)化方法對(duì)毒蛋白的表達(dá)量影響不大。T5代轉(zhuǎn)基因變異群體的抗性和農(nóng)藝性狀已經(jīng)穩(wěn)定，毒蛋白表達(dá)均高于1500ng/g。對(duì)T5代穩(wěn)定轉(zhuǎn)基因變異群體進(jìn)行了農(nóng)藝性狀分析，發(fā)現(xiàn)兩種轉(zhuǎn)基因方法獲得的轉(zhuǎn)基因植株均產(chǎn)生了廣泛的變異?？偨Y(jié)了兩種轉(zhuǎn)化方法下產(chǎn)生的變異類型：包括葉綠素含量、葉片大小、株高、果枝數(shù)、結(jié)鈴數(shù)、產(chǎn)量等變異。兩種轉(zhuǎn)化方法出現(xiàn)的相同變異有：株高變異都呈現(xiàn)出兩種趨勢(shì)，生育期也出現(xiàn)了相同的變異，變異

4、株系的產(chǎn)量均高于對(duì)照，馬克隆值均變大等。不同趨勢(shì)的變異為：花粉管通道法轉(zhuǎn)化的中99668葉片變小，果枝數(shù)增加，而農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化的中棉所24的變異趨勢(shì)與之相反。篩選出一批抗蟲且豐產(chǎn)、早熟、纖維品質(zhì)好變異性狀穩(wěn)定的后代，為育種工作提供了有用的遺傳材料。 篩選出的這些突變體材料，是棉花突變體研究的寶貴資源?？梢杂嗅槍?duì)性地進(jìn)行功能基因的研究。它們已經(jīng)具有抗蟲基因作為標(biāo)簽，可以通過分子標(biāo)記、Tail-PCR等手段克隆相關(guān)基因。有了這些突