納米羥基磷灰石-膠原-重組人骨形成蛋白-2復(fù)合支架的制備及細(xì)胞相容性.pdf

1、背景：
　　 利用骨組織工程學(xué)的理論，通過(guò)成骨細(xì)胞與支架共培養(yǎng)，測(cè)量細(xì)胞在材料上的增殖、分化情況，以此來(lái)評(píng)估生物支架材料的細(xì)胞相容性。
　　 目的：
　　 從細(xì)胞學(xué)角度評(píng)價(jià)復(fù)合材料納米羥基磷灰石/膠原/重組人骨形成蛋白-2對(duì)成骨細(xì)胞增殖、分化的影響，了解其細(xì)胞相容性，并與同種異體骨比較，為該材料的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 采用改良膠原酶消化法處理新生24h內(nèi)Wistar大鼠的顱蓋

2、骨，并進(jìn)行成骨細(xì)胞原代培養(yǎng)。通過(guò)堿性磷酸酶染色、蘇木精．伊紅染色、鈣結(jié)節(jié)茜素紅染色、倒置相差顯微鏡對(duì)提取的成骨細(xì)胞進(jìn)行觀察與鑒定。然后將培養(yǎng)狀況良好的第3代細(xì)胞與納米羥基磷灰石/膠原/重組人骨形成蛋白-2支架材料體外復(fù)合培養(yǎng)。培養(yǎng)第3，6，9d后，采用倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，堿性磷酸酶活性測(cè)定法、MTT法測(cè)定支架材料對(duì)成骨細(xì)胞分化、增殖的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1、通過(guò)原代培養(yǎng)提取的成骨細(xì)胞呈圓形懸浮于混合培養(yǎng)液

3、中，2小時(shí)后開(kāi)始逐漸貼壁。培養(yǎng)3天后，顯微鏡下可見(jiàn)細(xì)胞呈梭形及不規(guī)則形。堿性磷酸酶染色大部分細(xì)胞(95％以上)呈陽(yáng)性，經(jīng)茜素紅染色可見(jiàn)紅色礦化結(jié)節(jié)。
　　 2、ALP法和MTT法：該材料對(duì)成骨細(xì)胞增殖分化效果良好，并可促進(jìn)成骨作用。
　　 3、倒置相差顯微鏡下見(jiàn)納米羥基磷灰石/膠原/重組人骨形成蛋白-2復(fù)合材料周圍聚集大量成骨細(xì)胞，并隨時(shí)間增殖。
　　 4、掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)：納米羥基磷灰石/膠原/重組人骨形成蛋白