版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶(hù)提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、本實(shí)驗(yàn)采用SD大鼠為脊髓損傷打擊模型,分組給予高壓氧和低壓缺氧預(yù)處理,觀察預(yù)處理對(duì)脊髓損傷的神經(jīng)保護(hù)效應(yīng),并對(duì)保護(hù)機(jī)制進(jìn)行初步探討,同時(shí)對(duì)高壓氧治療脊髓損傷的療效給予評(píng)估。本文共分為以下三個(gè)部分內(nèi)容: 一、高壓氧和低壓缺氧預(yù)處理對(duì)大鼠脊髓損傷后神經(jīng)保護(hù)效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究 目的:通過(guò)建立高壓氧和低壓缺氧預(yù)處理脊髓損傷動(dòng)物模型,觀察預(yù)處理對(duì)成年大鼠急性脊髓損傷后不同時(shí)期神經(jīng)功能的影響,以探討預(yù)處理對(duì)脊髓損傷后的神經(jīng)保護(hù)效應(yīng)。
2、 方法: 1、高壓氧和低壓缺氧預(yù)處理動(dòng)物模型的建立:成年雌性大鼠隨機(jī)分組后,利用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物高壓氧艙和低壓氧艙,在相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)條件下,分別預(yù)處理5天。 2、脊髓損傷模型的建立:麻醉狀態(tài)下,手術(shù)顯露椎管及硬膜囊,用30g沖擊棒自5cm高度自由落體下墜致傷脊髓。沖擊棒下端直徑3mm,致傷能量為150gcf,建立脊髓損傷模型。 3、觀察項(xiàng)目: (1)行為學(xué)評(píng)價(jià):采用BBB運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分法,分別在脊髓損傷后1d、1w
3、、2w、4w和8w進(jìn)行評(píng)分。 (2)誘發(fā)電位的測(cè)定:各組大鼠分別在損傷后不同時(shí)期測(cè)定體感誘發(fā)電位和運(yùn)動(dòng)誘發(fā)電位檢測(cè)。 (3)透射電鏡:灌注固定后取損傷區(qū)中心1mm3置入10%戊二醛液,制片,電鏡下觀察采圖。 (4)HE染色光鏡下觀察:各組大鼠分別在損傷后不同時(shí)期灌注固定取材,行脊髓矢狀和冠狀石蠟切片的HE染色觀察。 (5)神經(jīng)束路示蹤:生物素化萄聚糖胺順行示蹤和辣根過(guò)氧化物酶逆行示蹤,觀察上行和下行軸突再
4、生情況,預(yù)處理對(duì)軸突再生的影響。 4、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容數(shù)據(jù)采用SPSS12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。 結(jié)果: 1、本實(shí)驗(yàn)高壓氧和低壓缺氧預(yù)處理及大鼠脊髓打擊傷模型建立可靠穩(wěn)定,具有較好的可重復(fù)性。 2、大鼠脊髓打擊模型在傷后1dBBB評(píng)分為0分,1w為2.86±1.03分,以后逐漸恢復(fù),8w為14.12±2.15分,經(jīng)高壓氧和低壓缺氧預(yù)處理后在各時(shí)期與非預(yù)處理?yè)p傷組相比較。 3、運(yùn)動(dòng)誘發(fā)電位和體感誘發(fā)電位的潛
5、伏期在脊髓損傷后明顯延長(zhǎng),在1w-4w各時(shí)期與非預(yù)處理?yè)p傷組相比較,潛伏期縮短,低壓缺氧預(yù)處理組更為明顯,差異有顯著性(p<0.05),4w后相對(duì)穩(wěn)定。 4、光鏡及電鏡觀察:脊髓損傷后1d可見(jiàn),損傷區(qū)中央灰質(zhì)出現(xiàn)大片出血、細(xì)胞腫脹、尼氏體消失,并有大量單核或多核炎性細(xì)胞浸潤(rùn);脊髓損傷第1w損傷區(qū)組織出現(xiàn)大片壞死灶,炎性反應(yīng)加劇;2w后脊髓損傷及周?chē)鷧^(qū)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減輕,4w損傷脊髓組織出現(xiàn)囊腔樣變化,8w以膠質(zhì)瘢痕為主。
6、結(jié)論: 1、大鼠打擊傷SCI模型與人類(lèi)SCI有一定相似性,個(gè)體差異不明顯,模型制備簡(jiǎn)單,穩(wěn)定重復(fù)性強(qiáng)。 2、高壓氧和低壓缺氧預(yù)處理后,大鼠在脊髓損傷后不同時(shí)期脊髓功能改善,運(yùn)動(dòng)誘發(fā)電位和體感誘發(fā)電位潛伏期縮短,病理變化減輕,神經(jīng)束路示蹤標(biāo)志陽(yáng)性纖維明顯增多,提示對(duì)大鼠脊髓損傷均有神經(jīng)保護(hù)作用。 3、高壓氧和低壓缺氧預(yù)處理對(duì)大鼠脊髓損傷具有一定的神經(jīng)保護(hù)作用。(本實(shí)驗(yàn)建立的是中度脊髓損傷模型)。 4、在本實(shí)
7、驗(yàn)條件下,低壓缺氧預(yù)處理對(duì)脊髓損傷的內(nèi)源性保護(hù)作用較高壓氧預(yù)處理的保護(hù)作用更為顯著。 二、高壓氧和低壓缺氧預(yù)處理對(duì)大鼠脊髓損傷后神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制的探討 目的:探討高壓氧和低壓缺氧預(yù)處理對(duì)大鼠脊髓損傷后神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制,為脊髓損傷的防治提供理論基礎(chǔ)。 方法:預(yù)處理及脊髓打擊傷實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型建立分組后,在不同時(shí)期內(nèi)取材,行免疫組織化學(xué)染色,RT-PCR和Westblot(蛋白印跡法)檢測(cè),觀察預(yù)處理對(duì)脊髓損傷后神經(jīng)細(xì)胞
8、凋亡、神經(jīng)干細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、軸突生長(zhǎng)抑制因子和嘌呤受體的影響。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容數(shù)據(jù)采用SPSS12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。 觀察項(xiàng)目: 1、神經(jīng)細(xì)胞凋亡,TUNEL染色觀察 2、GFAP免疫組織化學(xué)染色觀察 3、Nestin免疫組織化學(xué)染色觀察 4、VEGF免疫組織化學(xué)染色觀察 5、Nogo免役組織化學(xué)染色觀察 6、P2X7嘌呤受體mRNA和蛋白的定量 觀察結(jié)果
9、: 1、非預(yù)處理脊髓損傷1dTUNEL陽(yáng)性細(xì)胞逐漸增多,分布不均勻,灰質(zhì)和白質(zhì)中均可見(jiàn)。 2、GFAP表達(dá)于正常脊髓的中央灰質(zhì)和周?chē)踪|(zhì)。 3、預(yù)處理后1w-4w表達(dá)增加,尤其以低壓缺氧預(yù)處理組更為顯著。 4、非預(yù)處理SCI1dVEGF在大鼠脊髓損傷區(qū)及損傷周邊區(qū)高表達(dá),主要出現(xiàn)在軟脊膜和脊髓灰、白質(zhì)血管壁上的血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿內(nèi),脊髓灰、白質(zhì)內(nèi)的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞胞漿內(nèi)也出現(xiàn)表達(dá),。 5、非預(yù)
10、處理SCI后1d,在脊髓損傷區(qū)中央,未見(jiàn)到nogo陽(yáng)性細(xì)胞。2w后,損傷區(qū)附近白質(zhì),nogo陽(yáng)性免疫細(xì)胞有少量表達(dá),SCI后8w,見(jiàn)膠質(zhì)瘢痕區(qū)nogo陽(yáng)性表達(dá)反應(yīng),并且nogo表達(dá)陽(yáng)性區(qū)與膠質(zhì)瘢痕區(qū)相一致。 6、SCI后P2X7受體的表達(dá)變化:在低壓缺氧預(yù)處理組,傷后12h、3d、5d目的條帶幾乎不可見(jiàn),而高壓氧預(yù)處理組和非預(yù)處理?yè)p傷組卻表現(xiàn)明顯,尤其高壓氧預(yù)處理組在12h表達(dá)更為明顯。傷后7d三組無(wú)明顯差異。 結(jié)論:
11、 1、高壓氧和低壓缺氧預(yù)處理均可以通過(guò)抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡起到神經(jīng)保護(hù)作用。 2、在脊髓損傷的早期(本實(shí)驗(yàn)觀察到為2w之內(nèi)),高壓氧和低壓缺氧預(yù)處理均可以促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞活化,起到保護(hù)神經(jīng)元的作用。脊髓損傷后期(本實(shí)驗(yàn)觀察到為4w之后),高壓氧預(yù)處理有促進(jìn)膠質(zhì)細(xì)胞過(guò)度增生,增強(qiáng)膠質(zhì)瘢痕形成的可能。 3、脊髓損傷后可以激活神經(jīng)干細(xì)胞或前體細(xì)胞,高壓氧和低壓缺氧預(yù)處理均可以促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖和分化,尤其低壓缺氧預(yù)處理更為顯
12、著。 4、脊髓損傷可以導(dǎo)致內(nèi)源性VEGF在脊髓實(shí)質(zhì)中的表達(dá)增強(qiáng),高壓氧和低壓缺氧預(yù)處理可以促進(jìn)這一過(guò)程,通過(guò)促進(jìn)血管生成、改善局部微循環(huán)間接地保護(hù)神經(jīng)免受缺血缺氧損傷。 5、脊髓損傷后期(本實(shí)驗(yàn)觀察到為4w之后),軸突生長(zhǎng)抑制因子nogo的高表達(dá)是影響軸突生長(zhǎng)的重要因素,高壓氧和低壓缺氧預(yù)處理對(duì)脊髓損傷后nogo表達(dá)的影響不顯著。 6、低壓缺氧預(yù)處理可以在短期內(nèi)通過(guò)抑制P2X7受體的表達(dá),對(duì)脊髓損傷起到神經(jīng)保護(hù)作
13、用,而高壓氧預(yù)處理則不能,是通過(guò)其他途徑起到神經(jīng)保護(hù)作用的。 三、高壓氧治療實(shí)驗(yàn)性大鼠脊髓損傷的療效評(píng)價(jià) 目的:通過(guò)分組高壓氧治療,評(píng)估治療效果,為脊髓損傷的治療提供依據(jù)。 方法: 1、實(shí)驗(yàn)大鼠分為四組:非預(yù)處理?yè)p傷組、非預(yù)處理?yè)p傷后高壓氧治療組、高壓氧預(yù)處理后的高壓氧治療組和低壓缺氧預(yù)處理后的高壓氧治療組,立即分別給予高壓氧治療2周。 2、觀察項(xiàng)目: (1)行為學(xué)評(píng)價(jià):采用BBB運(yùn)動(dòng)功能
14、評(píng)分法,分別在治療后1w、2w、4w和8w進(jìn)行評(píng)分。 (2)誘發(fā)電位的測(cè)定:各組大鼠分別在治療后不同時(shí)期進(jìn)行體感誘發(fā)電位和運(yùn)動(dòng)誘發(fā)電位檢測(cè)。 (3)透射電鏡:灌注固定后取損傷區(qū)中心1mm3置入10%戊二醛液,制片,電鏡下觀察采圖。 (4)HE染色光鏡下觀察:各組大鼠分別在治療后不同時(shí)期灌注固定取材,行脊髓石蠟切片的HE染色觀察。 (5)免疫組織化學(xué)染色:觀察高壓氧治療后nestin和GFAP的表達(dá)變化。
15、 (6)神經(jīng)束路示蹤:生物素化萄聚糖胺(BDA)順行示蹤觀察下行軸突再生情況,觀察高壓氧治療對(duì)軸突再生的影響。 3、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容數(shù)據(jù)采用SPSS12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。 結(jié)果: 1、經(jīng)高壓氧治療后各組在各時(shí)期與非預(yù)處理?yè)p傷組相比較,評(píng)分明顯增高,非預(yù)處理?yè)p傷組SCI后1w為2.86±1.03分,8w為14.12±2.15分,而低壓缺氧預(yù)處理后高壓氧治療組1w為5.38±1.22分,8w為18.18±1.72分
16、,差異最為明顯(p<0.01)。 2、運(yùn)動(dòng)誘發(fā)電位和體感誘發(fā)電位的潛伏期在脊髓損傷后明顯延長(zhǎng),經(jīng)高壓氧治療后各組在各時(shí)期與非預(yù)處理?yè)p傷組相比較,潛伏期縮短,低壓缺氧預(yù)處理后高壓氧治療組更為明顯,差異有顯著性。 3、經(jīng)高壓氧治療后各組在各時(shí)期與非預(yù)處理?yè)p傷組相比較病理變化減輕,尤其在損傷區(qū)周?chē)鼮槊黠@。 4、經(jīng)高壓氧治療后各組GFAP和nestin表達(dá)增加,2w-4w較非預(yù)處理?yè)p傷組差異顯著,低壓缺氧預(yù)處理后高壓氧
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶(hù)所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶(hù)上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶(hù)上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶(hù)因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 高壓氧和低壓缺氧預(yù)適應(yīng)對(duì)缺血腦損傷的神經(jīng)保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf
- 高壓氧預(yù)處理對(duì)大鼠減壓病保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf
- 重復(fù)高壓氧預(yù)處理對(duì)神經(jīng)元保護(hù)作用的機(jī)制研究.pdf
- 和厚樸酚對(duì)大鼠脊髓損傷神經(jīng)保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 高壓氧預(yù)處理對(duì)大鼠視神經(jīng)不完全損傷的保護(hù)效應(yīng)及其機(jī)制研究.pdf
- 高壓氧對(duì)新生大鼠缺氧缺血性腦損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf
- 高壓氧預(yù)處理誘導(dǎo)脊髓神經(jīng)元氧化耐受作用及其機(jī)制.pdf
- 高壓氧治療對(duì)大鼠創(chuàng)傷性腦損傷的神經(jīng)保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf
- 線(xiàn)粒體GTPase相關(guān)通路調(diào)控下高壓氧對(duì)脊髓損傷大鼠神經(jīng)保護(hù)的機(jī)制研究.pdf
- 高壓氧對(duì)腦白質(zhì)疏松大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf
- 高壓氧預(yù)處理和后處理對(duì)老年大鼠術(shù)后認(rèn)知功能障礙保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf
- 不同壓力下高壓氧預(yù)處理對(duì)大鼠腦缺血-再灌注損傷的保護(hù)作用.pdf
- 高壓氧對(duì)微波輻射致大鼠腦損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf
- 不同療程高壓氧治療對(duì)新生大鼠缺氧缺血性腦損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf
- 高壓氧預(yù)處理對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用.pdf
- 胡椒堿對(duì)脊髓損傷大鼠神經(jīng)保護(hù)及作用機(jī)制實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 川芎嗪對(duì)大鼠脊髓繼發(fā)性損傷神經(jīng)保護(hù)作用及機(jī)制的研究.pdf
- 長(zhǎng)期重復(fù)高壓氧預(yù)處理對(duì)兔脊髓缺血再灌注損傷的作用.pdf
- 迷走神經(jīng)刺激聯(lián)合高壓氧治療對(duì)腦缺血損傷的神經(jīng)保護(hù)作用及機(jī)制實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 高壓氧預(yù)處理誘導(dǎo)兔脊髓缺血耐受的機(jī)制研究.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論