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文檔簡(jiǎn)介
1、半夏(Pinellia ternata(Thunh.) Breit)為天南星科半夏屬植物，是傳統(tǒng)名貴中藥材。半夏塊莖是中醫(yī)化痰燥濕、止痛消腫、止吐降逆的良藥。半夏在全國(guó)各地均有分布，雖分布廣泛，但由于過(guò)度開(kāi)采和缺乏科學(xué)規(guī)范的種植技術(shù)，半夏優(yōu)良種質(zhì)資源面臨稀缺。同時(shí)，針對(duì)半夏的分子遺傳轉(zhuǎn)化方面的研究還比較少，分子育種較為欠缺。
為了獲得兼具藥用成分高、抗逆性和抗病性強(qiáng)的半夏新品種，本研究以荊半夏為材料，利用半夏一體成苗技術(shù)獲得大
2、量無(wú)菌苗;然后通過(guò)優(yōu)化的農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化體系，將來(lái)源于擬南芥（Arabidopsis thaliana）的抗熱蛋白ERECTA(ER)、來(lái)源于金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）有助于提高生物堿表達(dá)量的高活性3-羥基-3-甲基戊二酰還原輔酶A(3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoAreduct-ase，HMGR)、來(lái)源于甜菜夜蛾（Spodoptera exigua）有助于提高植物抗逆能力的凋亡
3、抑制因子（Inhibitor of apoptosis proteins，IAPs）、抗除草劑雙丙氨酰磷抗性蛋白(Bioiaphos resistance，BAR)等編碼基因轉(zhuǎn)化到半夏植株中，獲得基因組整合的半夏植株。同時(shí)構(gòu)建HMGR和ER基因雙價(jià)高表達(dá)載體，讓這兩個(gè)基因在同一株半夏中有較高的表達(dá)。
通過(guò)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化后上述轉(zhuǎn)基因體系共得到301株抗性苗，提取基因組DNA，PCR驗(yàn)證后得到72株陽(yáng)性苗隨后利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(R
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