依達拉奉對驚厥持續(xù)狀態(tài)幼年大鼠海馬IL-1β和NF-κBp65表達的影響.pdf

1、目的： 1.觀察驚厥持續(xù)狀態(tài)(SC)幼年大鼠海馬白介素1β(IL-1β)、核因子κBp65(NF-κBp65)和TUNEL陽性細胞表達的變化；及依達拉奉對三者的變化的影響； 2.探討IL-1β和NF-κBp65在驚厥性腦損傷中的作用及其關(guān)系。 方法： 雄性SD幼年大鼠195只，分為生理鹽水對照組(NS組)、驚厥持續(xù)狀態(tài)組(SC組)和依達拉奉組(ED組)三大組；其中NS組、SC組和ED組又均隨機分為5個亞組

2、，分別于驚厥后4h、12h、24h、48h和72h處死。采用氯化鋰-匹魯卡品法制作驚厥持續(xù)狀態(tài)模型：幼年大鼠按127mg/kg劑量腹腔注射氯化鋰，18h后按1mg/kg劑量腹腔注射硫酸阿托品，30min后按100mg/kg劑量腹腔注射匹魯卡品；觀察大鼠行為學變化，記錄各組大鼠的驚厥率、驚厥潛伏期、驚厥程度分級、驚止時間及死亡情況。選擇驚厥發(fā)作達到Ⅳ～Ⅴ級，且終止驚厥發(fā)作后狀態(tài)良好的大鼠為合格SC大鼠模型。ED組在大鼠造模前三天予ED5m

3、g/kg腹腔注射，每天注射一次，連續(xù)3天。NS組用生理鹽水代替氯化鋰及匹魯卡品，其他處理同SC組。大鼠于驚厥后各時間點處死；光鏡、電鏡和TUNEL法檢測觀察大鼠海馬病理學改變及細胞凋亡情況；免疫組化法檢測海馬CA1區(qū)IL-1β和NF-κBp65蛋白表達動態(tài)變化；RT-PCR技術(shù)檢測海馬NF-κBp65 mRNA噠的動態(tài)變化。 結(jié)果： 1.驚厥持續(xù)狀態(tài)模型的建立：注射匹魯卡品后，有9只(9/130)大鼠未成功誘發(fā)驚厥，20

4、只(20/130)出現(xiàn)Ⅳ發(fā)作，其余大鼠101(101/130)均誘導出Ⅴ級驚厥發(fā)作。造模后死亡大鼠10(10/130)只，其中2只于驚厥后4h死亡；2只于驚厥后12h死亡；1只于驚厥后24h內(nèi)死亡；3只于48h死亡；2只死于驚厥后72h；總死亡率為7.69％(10/130)，造模成功率85.4％(111/130)。 2.HE染色：NS組大鼠海馬CA1區(qū)錐體細胞層次清晰，排列整齊，神經(jīng)元輪廓清晰，胞核大而圓。SC組大鼠出現(xiàn)不同程度

5、的神經(jīng)元變性及丟失，以海馬CA1區(qū)最顯著，驚厥后4h少量神經(jīng)元腫脹；12h排列欠整齊，受累數(shù)增加；24h胞漿胞核空泡化；48h細胞不規(guī)則，見紅色神經(jīng)元及空穴；72h有所減輕。ED組各時間點總體比SC組減輕。 3.電鏡：NS組大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細胞結(jié)構(gòu)清晰，胞膜及核膜完整光滑，核染色質(zhì)分布均勻，胞漿內(nèi)線粒體，高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細胞器豐富。SC組表現(xiàn)為：驚厥后4h神經(jīng)元毛細血管周圍水腫，12h部分內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴張，個別線

6、粒體輕度腫脹；24細胞間隙擴張，部分內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體擴張；48h以后內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張較前有所減輕，線粒體腫脹有加重。ED組各時間點改變均較SC組減輕。 4.RI-PCR檢測結(jié)果：NS組海馬NF-κBp65 mRNA表達無明顯變化，SC組于驚厥后4h開始少量增加，24h達高峰，之后緩慢下降，72h降至正常；ED組4h、12h和24h時間點海馬NF-κBp65mRNA表達較SC組均明顯下降(P<0.05或P<0.01)； ED組除24h時間

7、點外，其余各時間點與NS組表達無明顯差別。 5.免疫組化檢測結(jié)果： 5.1 IL-1β蛋白免疫組化檢測結(jié)果：NS組各時間點大鼠海馬CA1區(qū)可見少量IL-1β陽性細胞。SC組于SC后12h海馬CA1區(qū)IL-1β陽性細胞明顯增多，以24h最為顯著，48h開始減少；IOD值也均有升高，與NS組相應(yīng)時間點相比，IOD值差異均有非常顯著性(P均<0.01)； ED組中12h～48h時間點IL-1β陽性神經(jīng)元細胞均較SC組明顯減少，

8、但仍高于NS組；經(jīng)比較這三個時間點的IOD值均與SC組和NS組有顯著性差異(P<0.05或P<0.01)。 5.2 NF-κBp65蛋白免疫組化檢測結(jié)果：NS組各時間點大鼠海馬CA1區(qū)NF-κBp65蛋白少量表達。SC后4h表達開始增加，24h達高峰，后稍下降；與NS組相應(yīng)時間點相比，IOD值差異均有著性(P<0.05或P<0.01)； ED組中4h、12h和24h組NF-κBp65陽性神經(jīng)元細胞均較SC組明顯減少，除4h組外其

9、余4個時間點的IOD值仍高于NS組；經(jīng)比較ED組中4h、12h和24h時間點IOD值均與SC組有顯著性差異(P<0.05或P<0.01)。 6.TUNEL法檢測神經(jīng)元凋亡結(jié)果：NS組各時間點大鼠海馬CA1區(qū)均可見極少量TUNEL陽性細胞。SC組于SC后12h海馬CA1區(qū)TUNEL陽性細胞數(shù)顯著增加，48h達高峰，之后稍下降；ED組變化趨勢也與SC組相似，12h、24h、48h各亞組TUNEL陽性細胞數(shù)均較SC組顯著下降(P<0.