TLR4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在大鼠系膜增生性腎小球腎炎的變化及來氟米特對(duì)該途徑的干預(yù)作用.pdf

1、目的：觀察Toll樣受體4（Toll-like receptor4，TLR4）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在系膜增生性腎小球腎炎（Mesangial proliferative glomerulonephritis，MSPGN）大鼠腎組織中的表達(dá)變化情況，初步探討TLR4信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在MSPGN發(fā)病機(jī)制中的作用。觀察來氟米特(Leflunomide，LEF)對(duì)大鼠MSPGN的干預(yù)作用及對(duì)TLR4信號(hào)途徑的影響。
　　方法：1、60只SD雄性大鼠隨

2、機(jī)分為對(duì)照組、模型組，每組30只。模型組采用牛血清白蛋白（Bovine serum albumin，BSA）、脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)聯(lián)合四氯化碳（Carbon tetrachloride，CCl4）的方法建立MSPGN大鼠模型。分別于實(shí)驗(yàn)4、8、12周末觀察各組大鼠一般情況，檢測(cè)24小時(shí)尿蛋白定量、血肌酐(Serumcreatinine，SCr)、血清胱抑素C(Serum cystatin C，CYS-C

3、)水平; HE、PAS染色光鏡下觀察腎組織系膜增生程度;免疫組化二步法檢測(cè)TLR4、核因子-κB(Nuclearfactor-κB，NF-κB)、細(xì)胞因子IL-6、TNF-a的蛋白表達(dá)情況。2、48只SD雄性大鼠隨機(jī)分為4組:A組:正常對(duì)照組(n=12)B組:模型組(n=12)C組:LEF2mg/kg.d組(n=12)D組:LEF5mg/kg.d組(n=12)。B、C、D組采用BSA+LPS+CCh的方法建立MSPGN大鼠模型。分別于實(shí)

4、驗(yàn)4、8、12周末觀察各組大鼠一般情況，檢測(cè)24小時(shí)尿蛋白定量、SCr、CYS-C水平;HE、PAS染色光鏡下觀察腎組織系膜增生程度;免疫組化二步法檢測(cè)TLR4、NF-κB、細(xì)胞因子IL-6、TNF-a的蛋白表達(dá)情況。RT-PCR法檢測(cè)TLR4、NF-κB、細(xì)胞因子IL-6、TNF-a的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1、對(duì)照組大鼠24h尿蛋白定量、SCr、CYS-C水平在整個(gè)實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)無明顯變化(P＞0.05)，與對(duì)照組相比，模型組大鼠于

5、第4周即出現(xiàn)24h尿蛋白定量、SCr、CYS-C水平均顯著升高（P＜0.05），并隨時(shí)間延長呈持續(xù)性增加;2、對(duì)照組大鼠在整個(gè)實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)腎小球、腎小管形態(tài)及排列分布均正常，未見明顯改變。模型組大鼠從第4周開始即出現(xiàn)腎小球系膜細(xì)胞增生，系膜基質(zhì)增多，并隨造模時(shí)間延長，出現(xiàn)腎小球囊壁增厚，腎間質(zhì)增寬，部分腎間質(zhì)纖維化（Renalinterstitial fibrosis，RIF）改變;第4周開始模型組腎小球病理積分明顯高于對(duì)照組（P＜0.0

6、5）;3、第4周開始免疫組化結(jié)果顯示模型組大鼠TLR4、NF-κB、細(xì)胞因子IL-6、TNF-a在腎組織的表達(dá)均高于對(duì)照組（P＜0.05）。4、A組大鼠24h尿蛋白定量、SCr、CYS-C水平在整個(gè)實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)無明顯變化(P＜0.05)，與A組相比，B、C、D組大鼠24小時(shí)尿蛋白定量、SCr、CYS-C水平均高于A組(P＜0.05)，而C、D組的水平則明顯低于B組（P＜0.05）。且與C組相比，D組上述指標(biāo)明顯減低（P＜0.05）;5、A

7、組大鼠在整個(gè)實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)腎小球、腎小管均無明顯改變，排列分布及形態(tài)均正常。B、C、D組大鼠從第4周開始即出現(xiàn)腎小球系膜細(xì)胞增生，系膜基質(zhì)增多，與B組比較，C、D組大鼠的腎小球病理積分均顯著減低(P＜0.05），D組腎小球病理積分較C組積分顯著降低（P＜0.05）;6、第12周時(shí)免疫組化及RT-PCR結(jié)果顯示B、C、D組大鼠TLR4、NF-κB、細(xì)胞因子IL-6、TNF-a在腎組織的表達(dá)均高于A組(P＜0.05）;各治療組大鼠上述指標(biāo)在腎組