兔后囊膜混濁模型的建立及其分子機制研究.pdf

1、目的：利用兔后囊膜混濁動物模型，明確后囊膜混濁(PCO)形成時間，進一步研究PCO發(fā)生及發(fā)展的分子機制以及胞外信號調(diào)節(jié)激酶(ERK)信號傳導(dǎo)通路的作用機制。 方法：取63只兔行右眼晶狀體囊外摘除術(shù)(ECLE)，在術(shù)后各時間點裂隙燈顯微鏡下觀察PCO發(fā)生情況及形態(tài)，檢測后囊膜上增生細胞核抗原(PCNA)的表達以明確PCO形成最早期和最顯著期；在以上兩個時間點檢測術(shù)眼(最早期為A組，最顯著期為B組)和對照眼(C組)的后囊膜上的連接素

2、43(connexin43，Cx43)及IV型膠原的表達以明LECs的增殖程度、細胞之間及其與細胞外基質(zhì)(ECM)的相互作用及影響；運用westorn blot法和熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(FQ-PCR)法測量基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)、組織性金屬蛋白酶抑制物-2(TIMP-2)的基因及蛋白表達水平以明確兩者在調(diào)節(jié)膠原的動態(tài)平衡中的作用；同法檢測粘著斑激酶(FAK)、ERK1/2的基因及蛋白表達水平以了解在在PCO形成過程中ERK信號

3、傳導(dǎo)通路調(diào)控膠原分泌的作用機制。 結(jié)果：裂隙燈顯微鏡下發(fā)現(xiàn)術(shù)后1個月PCO開始形成，術(shù)后3個月PCO最為顯著；后囊膜PCNA陽性表達最早為術(shù)后2周，最顯著為術(shù)后3個月；Cx43檢測發(fā)現(xiàn)C組表達陰性，A組的陽性率為31.52±4.68％，B組的陽性率為54.34±3.65％，t=13.3193，P<0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。IV型膠原檢測發(fā)現(xiàn)C組表達陰性，A組OD值為0.203±0.032，B組OD值為0.477±0.085，t

4、=10.4506，P<0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，MMP-2，TIMP-2蛋白表達的檢測發(fā)現(xiàn)C組無MMP-2，TIMP-2蛋白表達；A組MMP-2OD值為45.28±2.57，B組OD值為26.74±3.26，t=-13.3985，P<0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，MMP-2蛋白表達下降。A組TIMP-20D值為22.46±3.15，B組OD值為32.14±2.92，t=6.7610，P<0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，TIMP-2蛋白表達升

5、高。基因水平的檢測發(fā)現(xiàn)MMP-2A組Ct值為23.40±0.66，B組值為17.70±0.60(圖13)；二者t檢驗比較有顯著性差異(t=14.9522，P<0.05)，MMP-2mRNA表達下降；TIMP-2A組Ct值為13.40±0.663 B組Ct值為19.27±0.82；二者t檢驗比較有顯著性差異(t=9.3808，P<0.05)，TIMP-2mRNA表達增強。FAK、ERK1/2蛋白表達的檢測發(fā)現(xiàn)C組無FAK、ERK1/2蛋白

6、表達；A組FAKOD值為24.68±3.12，B組0D值為32.58±3.17，t=5.3284，P<0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，F(xiàn)AK蛋白表達升高。A組ERK1/2OD值為30.46±3.25，B組OD值為43.52±4.17，t=7.4108，P<0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，ERK1/2蛋白表達升高?；蛩降臋z測發(fā)現(xiàn)FAKA組Ct值為16.77±0.45，B組值為24.77±0.85(圖13)；二者t檢驗比較有顯著性差異(t=14

7、.3942，P<0.05)，F(xiàn)AK mRNA表達增強；ERK1A組Ct值為14.73±0.40；B組Ct值為21.40±0.79；二者t檢驗比較有顯著性差異(t=12.9641，P<0.05)，ERK1mRNA表達增強。 結(jié)論：兔ECLE手術(shù)后可成功建立后囊膜混濁模型；術(shù)后2周為PCO形成最早期，術(shù)后3月為PCO形成的最顯著期：ERK信號傳導(dǎo)通路在LECs調(diào)控ECM合成過程中起到重要作用：殘留的LECs由于激活的ERK1/2產(chǎn)生