維胃方對(duì)胃潰瘍大鼠胃黏膜氨基己糖含量影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、消化性潰瘍（peptic ulcer，PU）是一種臨床上常見(jiàn)的慢性復(fù)發(fā)性疾病。近年來(lái)胃黏膜保護(hù)劑、H2受體拮抗劑（H2R）和質(zhì)子泵抑制劑（PPI）的應(yīng)用及標(biāo)準(zhǔn)的抗HP治療使近期療效明顯提高，但潰瘍復(fù)發(fā)仍難以避免，停藥后1年復(fù)發(fā)率約30%～50%[2]，且由于費(fèi)用、副作用、病人依從性差等問(wèn)題的存在，使該病的復(fù)發(fā)率居高不下，因此尋找并開(kāi)發(fā)治療PU的天然藥物成為當(dāng)前迫切而重要的任務(wù)。 消化性潰瘍的發(fā)病機(jī)理復(fù)雜，目前被廣泛接受的是攻擊因

2、子和防御機(jī)制平衡學(xué)說(shuō)。胃黏膜的疏水性具有重要的保護(hù)防御意義，在潰瘍的發(fā)生、發(fā)展和復(fù)發(fā)過(guò)程中都起著十分重要的作用。胃黏膜的疏水性強(qiáng)，則胃黏膜的防御能力較強(qiáng)，則潰瘍?nèi)菀子?，不易?fù)發(fā)；反之，則潰瘍?nèi)菀桩a(chǎn)生，難以治愈，即使短期治愈，也容易復(fù)發(fā)。胃黏膜疏水性的物質(zhì)基礎(chǔ)是由黏液凝膠內(nèi)脂類物質(zhì)（主要為磷脂）和糖蛋白（主要為氨基己糖）組成。研究證明：氨基己糖含量與潰瘍指數(shù)呈負(fù)相關(guān)，和反映粘膜完整性的胃粘膜跨膜電位呈正相關(guān)，氨基己糖含量的變化已成為廣泛

3、用于判斷胃粘膜損傷和藥物療效的重要參數(shù)之一。 維胃方是導(dǎo)師治療消化性潰瘍的經(jīng)驗(yàn)方，由茯苓、蒲公英、白及、三七組成，該方以健脾和胃，通絡(luò)止痛為法，臨床效果良好。為觀察該方治療潰瘍的療效并進(jìn)一步探討其治療作用機(jī)制，本課題在以往研究的基礎(chǔ)上，采用適合觀察藥物治療效果的乙酸致大鼠GU模型，用分光光度比色法測(cè)定胃黏膜氨基己糖含量，同時(shí)觀察GU的大體愈合情況、測(cè)胃液PH值、觀察病理組織切片，以闡明臨床療效機(jī)理，旨在從胃黏膜防御機(jī)制方面探討維

4、胃方對(duì)胃潰瘍的治療作用，為維胃方進(jìn)一步的應(yīng)用開(kāi)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)方法: 1.動(dòng)物分組及給藥 雄性SPF級(jí)Wistar大鼠56只，體重180-220g，根據(jù)完全隨機(jī)法分7組，每組8只：正常組，正常飲食；模型組與自愈組，冰乙酸造模術(shù)后自由飲食；維胃方高、中、低劑量組、雷尼替丁組，均于造模術(shù)后第4天開(kāi)始分別灌服各劑量維胃方、雷尼替丁混懸液（1ml/100g體重），每日1次，共7天，同時(shí)正常飲食。模型組造模后第4天處死

5、取材；其余各組大鼠在造模后第11天處死取材。 2.制備大鼠胃潰瘍模型 造模方法參照經(jīng)典冰醋酸法[3]，并加以改造。大鼠造模前24小時(shí)禁食不禁水。按3.5ml/kg體重經(jīng)腹腔內(nèi)注射10%水合氯醛麻醉大鼠，腹部備皮、酒精消毒，鋪上手術(shù)洞巾，自劍突下沿腹中線剪一2cm縱形切口，將胃體移出腹腔，用直徑約5mm的圓形濾紙，蘸100%冰醋酸貼于胃竇前壁1min后還納胃體，縫合腹肌、皮膚，縫合線處及其周?chē)俅蜗尽?3.取材及

6、指標(biāo)檢測(cè) 處死大鼠后取出胃，立即測(cè)定胃液PH值，然后結(jié)扎賁門(mén)及幽門(mén)，10%甲醛溶液10ml由賁門(mén)注入胃腔，固定10分鐘，剪開(kāi)胃大彎，觀察胃潰瘍的大體愈合情況；取部分潰瘍周?chē)?mm處組織放入含10%甲醛溶液中固定12～16h（4℃），經(jīng)常規(guī)脫水、石蠟包埋、切片、HE染色后置光學(xué)顯微鏡下觀察胃粘膜組織病理學(xué)情況；用玻片將剩余腺胃部胃黏膜組織及黏液輕輕刮下，低溫冷凍后稱重，置于2ml生理鹽水中，按常法制備成勻漿，置玻璃試管中，3000

7、r/min離心10min，取上清液儲(chǔ)于-20℃，分別用于測(cè)定蛋白和氨基己糖含量。 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理: 本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±S）表示，使用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。多樣本均數(shù)比較用單因素方差（One-way ANOVA）分析。組間均數(shù)兩兩比較若方差齊性，用Least-significant difference（LSD）法；若方差不齊性，用Tamhane's T2方法。P≤0.05為差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)

8、果: （一）胃液PH值的變化模型組大鼠胃液PH值明顯高于正常組（P<0.01）。維胃方中劑量組與正常組比較差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。雷尼替丁組與模型組比較有顯著性差異（P<0.05）。維胃方各劑量組與雷尼替丁組比較，無(wú)顯著性差異（P>0.05）。 （二）大體標(biāo)本觀察正常組大鼠胃粘膜光整完好，無(wú)充血、水腫、糜爛等。模型組大鼠胃粘膜漿膜層充血水腫，表面可見(jiàn)少量淡咖啡色物質(zhì)，粘膜充血、水腫、糜爛，多處點(diǎn)狀或線狀出血點(diǎn)和

9、潰瘍。自愈組大鼠胃粘膜愈合不良，見(jiàn)明顯潰瘍面，粘膜充血明顯，見(jiàn)點(diǎn)狀出血，組織粘連較明顯。維胃方高、中劑量組大鼠胃粘膜絕大部分愈合良好，表面光滑，輕度瘀血，僅見(jiàn)個(gè)別小潰瘍點(diǎn)或小范圍瘢痕增生；低劑量組大鼠胃粘膜輕度充血水腫，尚存在線狀出血點(diǎn)或較小潰瘍，瘀血較為明顯，局部有組織小粘連。雷尼替丁組大鼠胃粘膜表面光滑，輕度瘀血，未見(jiàn)潰瘍，僅見(jiàn)少量出血點(diǎn)，漿膜面少許粘連。 （三）光學(xué)顯微鏡下觀察正常對(duì)照組大鼠胃粘膜層光整完好，腺體排列整齊，

10、未見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)及粘膜下出血傾向。模型組大鼠胃粘膜部分中斷，潰瘍表面覆蓋大量紅細(xì)胞，潰瘍處腺體完全破壞，對(duì)應(yīng)固有層和粘膜下層毛細(xì)血管內(nèi)可見(jiàn)少量瘀血，部分毛細(xì)血管破裂出血及滲出；粘膜下層小動(dòng)脈內(nèi)可見(jiàn)血栓形成，也可見(jiàn)嗜酸粒細(xì)細(xì)胞浸潤(rùn)；部分潰瘍深及肌層，可見(jiàn)平滑肌細(xì)胞排列紊亂或出現(xiàn)斷裂。自愈組大鼠胃黏膜缺損較大，腺細(xì)胞排列紊亂，有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，見(jiàn)瘢痕纖維生成，偶見(jiàn)血栓。維胃方高、中劑量組大鼠胃粘膜僅見(jiàn)上皮細(xì)胞腫脹，腺體間隙擴(kuò)大，其他部分及粘膜下

11、層微循環(huán)無(wú)明顯病理改變。低劑量組部分潰瘍破壞粘膜下層，但病理變化均較輕。雷尼替丁組情況類似維胃方高、中劑量組，粘膜完整，腺體結(jié)構(gòu)良好，未見(jiàn)明顯潰瘍病變。 （四）胃黏膜氨基己糖含量變化與模型組比較，維胃方可顯著增加胃粘膜氨基己糖含量（P<0.05），中劑量組最明顯（P<0.01）；高、低劑量組與雷尼替丁組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；維胃方各劑量組與自愈組比較差異顯著（P<0.05），且與中劑量組差異最顯著（P<0.01）。

12、 結(jié)論: 1.冰乙酸直接作用胃漿膜表面，潰瘍形成造模成功率高，其愈合速度與人類潰瘍極為相似，病理組織切片顯示，符合慢性胃潰瘍的病理過(guò)程，此動(dòng)物模型適合于藥物療效研究。 2.胃液PH值的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果中可以看出：模型組胃液PH值高于正常組，表明手術(shù)造模對(duì)動(dòng)物本身就是一種應(yīng)激，為防止乙酸的損害作用，大鼠機(jī)體應(yīng)激性的調(diào)動(dòng)體內(nèi)的平衡機(jī)制，迅速中和酸性，以保護(hù)其受損傷的胃黏膜，這可能是模型組胃液pH值升高的原因。 3.從胃

13、黏模大體標(biāo)本觀察發(fā)現(xiàn)，在用藥各組潰瘍面愈合情況良好，其中維胃方中劑量組效果最好，其次為維胃方高劑量組及雷尼替丁組，與自愈組有明顯區(qū)別。 4.光學(xué)顯微高倍鏡下觀察胃黏膜病理組織切片，維胃方中劑量組效果最佳，部分機(jī)制是通過(guò)改善微循環(huán)、抗炎和細(xì)胞再生這些方面發(fā)揮作用。 5.維胃方各治療組胃黏膜組織勻漿中氨基己糖含量明顯高于模型組，也高于雷尼替丁組，表明維胃方可以促進(jìn)氨基己糖含量升高，起到保護(hù)胃黏膜的作用，其機(jī)理可能與保持胃粘膜

14、的疏水性及胃粘膜完整性相關(guān)，療效優(yōu)于西藥對(duì)照組。 綜上所述，本實(shí)驗(yàn)采用綜合造模方法成功復(fù)制慢性胃潰瘍大鼠模型，模型組組織形態(tài)學(xué)觀察符合胃潰瘍的病理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，維胃方各組均顯示對(duì)潰瘍組織的良好修復(fù)作用，另外胃黏膜組織勻漿中HS含量明顯高于模型組，表明維胃方可以促進(jìn)HS含量升高，起到保護(hù)胃黏膜的作用。以中劑量組療效更為顯著，與西藥對(duì)照組相比，胃黏膜HS含量明顯升高，說(shuō)明療效優(yōu)于西藥對(duì)照組（雷尼替丁組）。實(shí)驗(yàn)證明維胃方可以通過(guò)增強(qiáng)胃黏膜防