復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)(RSA)相關(guān)miRNA-27a、瘦素的表達(dá)及功能研究.pdf

1、目的:1.檢驗miRNA-27a在正常妊娠與復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)絨毛組織中的差異表達(dá)。驗證基因芯片檢測結(jié)果。
　　2.在HTR-8滋養(yǎng)細(xì)胞中過表達(dá)與抑制表達(dá)miRNA-27a，檢測miRNA-27a對瘦素表達(dá)的影響，探討miRNA-27a與瘦素之間的調(diào)控關(guān)系。
　　3.研究miRNA-27a對人正常滋養(yǎng)細(xì)胞(HTR-8)的凋亡的影響，探討miRNA-27a在復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)中的作用，為復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)的研究提供理論依據(jù)。
　　方

2、法:1.應(yīng)用實時熒光定量RT-PCR(Real-time RT-PCR)方法檢測miRNA-27a在15例復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)患者（實驗組）及15例正常妊娠絨毛組織（對照組）中的表達(dá)水平。
　　2.采用miRNA過表達(dá)與抑制表達(dá)技術(shù)，在人滋養(yǎng)細(xì)胞系（HTR-8）中過表達(dá)與抑制表達(dá)miRNA-27a，RT-PCR技術(shù)檢測在人滋養(yǎng)細(xì)胞系中miRNA-27a與瘦素mRNA的表達(dá)水平，Western-blot技術(shù)檢測瘦素蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。明確m

3、iRNA-27a與瘦素之間在mRNA和蛋白質(zhì)水平的調(diào)控關(guān)系。
　　3.在HTR-8細(xì)胞中過表達(dá)與抑制表達(dá)miRNA-27a，采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測HTR-8細(xì)胞凋亡的變化。
　　結(jié)果:1.對照組與實驗組絨毛組織中均有miRNA-27a表達(dá)，其表達(dá)量分別為0.5094±0.1926和1.2213±0.2455，實驗組絨毛組織中miRNA-27a表達(dá)高于對照組，P＜0.001，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，與文獻(xiàn)報道基因芯片檢測結(jié)果相符。

4、r>　　2.在人滋養(yǎng)細(xì)胞系(HTR-8)中，過表達(dá)miRNA-27a后，RT-PCR結(jié)果顯示miRNA-27a的表達(dá)增加(P＜0.05)，而Leptin mRNA的表達(dá)降低(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義;抑制miRNA-27a的表達(dá)后，RT-PCR結(jié)果顯示miRNA-27a的表達(dá)降低(P＜0.05)，而Leptin mRNA的表達(dá)增加(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義;Western-blot檢測結(jié)果顯示，過表達(dá)miRNA-27a后

5、，Leptin蛋白質(zhì)的表達(dá)降低(P＜0.05)，抑制miRNA-27a的表達(dá)后，Leptin蛋白質(zhì)的表達(dá)增加(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。表明miRNA-27a與Leptin在mRNA及蛋白質(zhì)水平存在負(fù)性調(diào)控關(guān)系。
　　3.流式細(xì)胞技術(shù)檢測結(jié)果顯示，過表達(dá)miRNA-27a后，細(xì)胞凋亡率增加(P＜0.05);抑制miRNA-27a的表達(dá)后，細(xì)胞凋亡率降低(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論:1.在復(fù)發(fā)性自然流