健脾清熱活血方藥介導(dǎo)Wnt-β-catenin-TCF通路干預(yù)潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)癌變的研究.pdf

1、目的:觀察潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)癌變(ulcerativecolitisassociatedcarcinogenesis，UCAC或簡(jiǎn)稱(chēng)潰結(jié)相關(guān)癌變)小鼠組織形態(tài)、超微結(jié)構(gòu)以及結(jié)腸黏膜β連環(huán)蛋白(β-catenin)、T細(xì)胞因子4(Tcellfactor4，Tcf-4)、C-myc、細(xì)胞周期素1(CyclinD1)表達(dá)變化，探討健脾清熱活血方藥防治潰結(jié)相關(guān)癌變的可能機(jī)制。
　　 方法:120只清潔級(jí)Balb/c小鼠隨機(jī)分6組，每組20

2、只，分設(shè)正常組、模型組、對(duì)照組(0.4g/kg)、治療組(4.29g/kg，8.58g/kg，17.16g/kg);除外正常組，其余各組采用DMH/DSS復(fù)合法制備潰結(jié)相關(guān)癌變模型，模型制備結(jié)束后，對(duì)照組給予美沙拉嗪配制液，治療組分別給予不同劑量健脾清熱活血方藥水提液，模型組和正常組予等劑量生理鹽水灌胃處理，連續(xù)干預(yù)16周。應(yīng)用光鏡、透射電鏡觀察潰結(jié)相關(guān)癌變小鼠結(jié)腸組織形態(tài)學(xué)及超微結(jié)構(gòu)變化，應(yīng)用免疫組化(Immunohistochemi

3、stry)、Western-blot技術(shù)、實(shí)時(shí)熒光定量(Real-time)PCR技術(shù)檢測(cè)β-catenin、Tcf-4、C-myc、CyclinD1等在潰結(jié)相關(guān)癌變中的表達(dá)以及不同劑量健脾清熱活血方藥干預(yù)上述指標(biāo)的變化。
　　 結(jié)果:(1)正常組小鼠結(jié)腸肉眼未見(jiàn)明顯異常，光鏡下可見(jiàn)部分結(jié)腸黏膜有少許炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，電鏡下上皮細(xì)胞大小一致、排列整齊、結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞器均未見(jiàn)明顯異常;模型組結(jié)腸肉眼可見(jiàn)漿膜層散在、多處息肉狀隆起變化，

4、光鏡下可見(jiàn)黏膜上皮脫落，腺體萎縮、高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變，部分癌變，電鏡下可見(jiàn)大量大小不等、排列紊亂的上皮細(xì)胞，胞核不規(guī)則、核仁增大并上移，線粒體大量增生、形態(tài)欠規(guī)則，局灶可見(jiàn)明顯擴(kuò)張、腫脹;對(duì)照組和各治療組小鼠近盲腸處結(jié)腸黏膜肉眼可見(jiàn)充血、水腫，均較模型組有不同程度的減輕，漿膜層偶可見(jiàn)息肉狀隆起樣改變，光鏡下各組結(jié)腸黏膜均可見(jiàn)到充血腫脹，個(gè)別輕度不典型增生和大量淋巴濾泡出現(xiàn)、未見(jiàn)潰瘍及癌變，電鏡下各組亦均可見(jiàn)上皮細(xì)胞體積明顯變小，核染色質(zhì)邊

5、集、核固縮或碎裂，核膜斷裂，明顯調(diào)亡小體形成。(2)正常組β-catenin胞膜陽(yáng)性表達(dá)，Tcf-4、C-myc、CyclinD1為陰性;模型組β-catenin、Tcf-4呈胞質(zhì)和/或胞核異位表達(dá)，C-myc、CyclinD1呈胞漿異位表達(dá)，與正常組有明顯差異(P＜0.05）;對(duì)照組和治療組β-catenin、Tcf-4、C-myc、CyclinD1陽(yáng)性表達(dá)減少，多以胞膜為主，均與模型組有明顯差異(P＜0.05)，對(duì)照組與各治療組之間

6、均有明顯差異(P＜0.05)，其中各治療組之間無(wú)明顯差異(P＞0.05)。(3)與正常組比較，模型組結(jié)腸β-catenin、Tcf-4、C-myc、CyclinD1蛋白及其mRNA呈高表達(dá)特點(diǎn)(P＜0.05）;對(duì)照組和治療組可明顯下調(diào)β-catenin、Tcf-4、C-myc、CyclinD1蛋白及其mRNA，與模型組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，對(duì)照組與各治療組之間均有明顯差異（P＜0.05），其中各治療組之間無(wú)明顯差異(P＞0