一組凋亡相關(guān)蛋白p53、caspase3、組織蛋白酶D、survivin和Fas在非小細胞肺癌中的表達及意義.pdf

1、凋亡是人體細胞重要和必備的生理過程。近年來凋亡異常被認為是參與腫瘤發(fā)生和進展的重要分子機制之一而受到越來越多的關(guān)注并成為腫瘤研究領(lǐng)域的熱點方向之一。p53基因的抑癌作用在于對DNA異常的監(jiān)控和修復(fù)，對未能修復(fù)的細胞則誘導(dǎo)其凋亡。p53基因突變參與多種腫瘤包括肺癌的發(fā)生與進展的機制之一可能與其誘導(dǎo)細胞凋亡的功能異常有關(guān)。caspase 3是凋亡過程的效應(yīng)酶。組織蛋白酶D(Cathepsin D)(Cat D)是正常細胞內(nèi)即普遍存在的溶酶體

2、及內(nèi)體酶。在惡性腫瘤中的表達并不恒定，結(jié)論分歧．新近的研究則集中于其參與凋亡的作用。有研究表明在十字孢堿誘導(dǎo)的人纖維母細胞的凋亡過程中該酶被從溶酶體釋放到胞漿中并發(fā)現(xiàn)其與凋亡的線粒體通路存在關(guān)聯(lián)。survivin作為凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein，IAP)家族的一員被廣泛研究，Survivin通過多途徑抑制caspase效應(yīng)分子的活化以及直接抑制其活性的方式實現(xiàn)抑制凋亡的作用。Fas屬于死亡受

3、體家族，與其配體(Fas-L)結(jié)合激活細胞凋亡通路。惡性腫瘤細胞及免疫細胞中Fas和Fas-L的狀態(tài)制約機體對惡性腫瘤的免疫反應(yīng)，可能是參與惡性腫瘤的發(fā)生和進展的機制之一。本研究利用免疫組織化學(xué)方法檢測p53、caspase 3、cat D、survivin和fas在非小細胞肺癌(NSCLC)中的表達，探討其表達的意義及可能存在的傳導(dǎo)凋亡信號的作用。 材料與方法 1、材料 80例原發(fā)性NSCLC肺癌組織及15例癌

4、旁正常肺組織來自中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一臨床學(xué)院2001-2005年原發(fā)性肺癌患者外科手術(shù)切除標本，患者術(shù)前均未接受放、化療。 2、主要試劑 抗體包括：鼠抗人單克隆anti-P53抗體；鼠抗人單克隆anti-caspase 3抗體；兔抗人多克隆anti-cathepsin D抗體；兔抗人多克隆anti-survivin抗體；兔抗人多克隆aoti-Fas抗體。 3、儀器 切片機、烤片機、濕盒、高壓鍋、溫育箱、O

5、lympus顯微鏡、顯微照相裝置、微機等。 4、免疫組化 標本用中性福爾馬林溶液固定，石蠟包埋后，行抗P53、caspase3、cathepsin D、survivin和抗Fas免疫組織化學(xué)染色，染色方法按鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶法試劑盒說明書步驟進行。以PBS代替一抗作為陰性對照。 5、統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS for windows 13.0統(tǒng)計分析軟件進行分析。采用卡方檢驗和確切概率法分析P5

6、3、caspase 3、cathepsin D、survivin及Fas表達與臨床病理因素關(guān)系以及上述指標在肺癌細胞和癌周正常組織中表達的差異。采用Spearman相關(guān)分析分析上述各指標在肺癌中表達的關(guān)聯(lián)。P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果 1、p53在NSCLC癌細胞及癌旁肺組織中的表達 P53在癌旁正常肺組織中不表達(0/15)。在NSCLC癌細胞中P53的陽性率為53.8％(42/80)，顯著高于正常肺組織

7、(P<0.01)。P53在肺鱗癌和腺癌中的陽性率分別為52.9％(18/34)和56.4％(22/39)，二者比較無顯著性差異(P>0.05)。P53在NSCLC癌細胞中的表達與患者性別、年齡、腫瘤分化、臨床分期等病理、臨床參數(shù)間無顯著相關(guān)性(P>0.05)。 2、caspase 3在NSCLC癌細胞及癌旁肺組織中的表達 Caspase 3在NSCLC癌周正常肺組織中表達，陽性率為46.67(7/15)，在NSCLC癌細

8、胞中也表達，陽性率為53.75％(43/80)。二者無顯著差異(P>0.05)。Caspase 3表達于NSCLC癌細胞胞漿和部分胞核。在肺鱗癌和腺癌中的陽性率分別為47.1％(16/34)和56.4％(22/39)，二者比較無顯著性差異(P>0.05)。Caspase 3在NSCLC癌細胞中的表達與患者性別、年齡、腫瘤分化、臨床分期等病理、臨床參數(shù)間無顯著相關(guān)性(p>0.05)。 3、Cathepsin D在NSCLC癌細胞及

9、癌旁肺組織中的表達 Cathepsin D在NSCLC癌周正常肺組織中表達，陽性率為53.33％(8/15)。在NSCLC癌細胞中也表達，陽性率為63.75％(51/80)。二者之間無顯著差異(P>0.05)。Cathepsin D表達于NSCLC癌細胞胞漿。在肺鱗癌和腺癌中的陽性率分別為61.8％(21/34)和64.1％(25/39)，二者比較無顯著性差異(p>0.05)。Cathepsin D在NSCLC癌細胞中的表達與患

10、者性別、年齡、腫瘤分化、臨床分期等病理、臨床參數(shù)間無顯著相關(guān)性(p>0.05)。 4、survivin在NSCLC癌細胞及癌旁肺組織中的表達 Survivin在NSCLC癌周正常肺組織中不表達(0/15)。在NSCLC癌細胞中表達的陽性率為47.50％(38/80)，高于癌周正常肺組織(p<0.01)。Survivin表達于NSCLC癌細胞胞漿。在肺鱗癌和腺癌中的陽性率分別為58.8％(20/34)和38.5％(15/3

11、9)，二者比較無顯著性差異(p>0.05)。Survivin在NSCLC癌細胞中的表達與患者性別、年齡、腫瘤分化、臨床分期等病理、臨床參數(shù)間無顯著相關(guān)性(p>0.05)。 5、Fas在NSCLC癌細胞及癌旁肺組織中的表達 Fas在NSCLC癌周正常肺組織中表達，陽性率為60％(9/15)。在NSCLC癌細胞中也表達，陽性率為50％(40/80)。二者之間無顯著差異(P>0.05)。Fas表達于NSCLC癌細胞膜和胞漿。在

12、肺鱗癌和腺癌中的陽性率分別為41.2％(14/34)和59.0％(23/39)，二者比較無顯著性差異(p>0.05)。Fas在NSCLC癌細胞中的表達與患者性別、年齡、腫瘤分化、臨床分期等病理、臨床參數(shù)間無顯著相關(guān)性(p>0.05)。 6、各蛋白表達的相關(guān)性分析 P53和survivin在NSCLC中的表達水平呈正相關(guān)(R=0.262，P=O.020)。Cat D和Fas在NSCLC中的表達水平呈正相關(guān)(R=0.375，

13、P=0.001)。 結(jié)論： (1)p53及survivin在NSCLC癌細胞中的表達高于癌周正常肺組織。 (2)caspase 3、cat D和Fas在NSCLC癌細胞及癌周正常肺組織中的表達無顯著差異。 (3)p53、caspase 3、cat D、survivin和Fas在NSCLC癌細胞中的表達與病理類型、分化程度、患者年齡、性別、臨床分期這些病理、臨床參數(shù)無顯著關(guān)聯(lián)。 (4)p53和sur