供者MDSCs預(yù)防移植物抗宿主病及機制研究.pdf

1、目的：明確在白消安聯(lián)合氟達拉濱化療方案預(yù)處理小鼠Haplo-HSCT GVHD模型上，研究甲強龍、G-CSF動員的供者MDSCs預(yù)防移植物抗宿主病及其機制。
　　方法：通過白消安聯(lián)合氟達拉濱方案預(yù)處理化療、以C57BL/6小鼠♂和DBA/2小鼠♀雜交的子一代小鼠（B6D2F1）為受者，回輸C57BL/6小鼠的骨髓和脾細胞建立半相合骨髓移植后GVHD模型。于移植當天，回輸甲強龍或rhG-CSF動員的供者MDSCs。實驗分四組，C57

2、BL/6供者小鼠的10*106骨髓細胞（BM）和75*106脾細胞（SPL）加甲強龍動員的6*106 MDSCs或G-CSF動員的MDSCs或靜息MDSCs6*106個，或均不加。應(yīng)用流式細胞技術(shù)驗證供者細胞的植入，并通過觀察記錄F1受者小鼠移植后體重的變化、aGVHD的臨床表現(xiàn)、生存情況以及靶器官的組織病理。應(yīng)用qPCR技術(shù)檢測動員前后MDSCs microRNA155、microRNA21,ARG1、iNOS等表達情況，應(yīng)用MLR方

3、法檢測MDSCs抑制功能。
　　結(jié)果：①GVHD模型的建立：以白消安20ug/g和氟達拉濱10ug/g聯(lián)合方案預(yù)處理化療B6D2F1小鼠，回輸C57BL/6供者小鼠的10*106骨髓細胞加75*106脾細胞，觀察脾細胞組出現(xiàn)體重減輕、腹瀉、弓背、脫毛等GVHD臨床癥狀，流式驗證供者CD4、CD8+T淋巴細胞、B淋巴細胞及樹突狀細胞的成功植入，成功建立C57BL/6→B6D2F1 haplo-HSCT模型。②甲強龍、G-CSF動員劑

4、量的確定：甲強龍(4mg/只 qd*3)動員骨髓MDSCs達到80％，G-CSF(250 ug/kg qd*5)動員骨髓MDSCs比例達到90%，能夠滿足實驗要求。③甲強龍、G-CSF動員的供者MDSCs預(yù)防GVHD的療效：甲強龍組與G-CSF組較對照組相比，受鼠體重下降較緩慢，GVHD癥狀較輕，移植后d10天取受者的皮膚、大腸、小腸、肺等靶器官病理組織行HE染色，病理顯示：甲強龍組與G-CSF組靶器官淋巴細胞浸潤較少，炎癥輕。④MDS

5、Cs預(yù)防GVHD的機制：甲強龍、G-CSF動員的MDSCs上調(diào)miR-155、miR-21水平，其中miR-21的水平高于miR-155水平。G-CSF動員的MDSCs的iNOS表達較對照組及MP組明顯升高。
　　結(jié)論：1.甲強龍、G-CSF動員的供者MDSCs能夠有效預(yù)防/減輕GVHD。
　　2.甲強龍、G-CSF動員的供者MDSCs可能通過上調(diào)其microRNA155、microRNA21、iNOS表達，發(fā)揮其抑制功能而