CD4+CD25+Treg和CD4+PD-1+T細(xì)胞亞群在HIV感染者-艾滋病人外周血的分布及其臨床意義.pdf

1、艾滋病（人類獲得性免疫缺陷綜合征）是由人類免疫缺陷病毒(HIV)引起，以人體免疫系統(tǒng)全面崩潰為特征的，病死率高且傳播速度快的一種傳染病。HIV本身并不會(huì)引發(fā)任何疾病，而是當(dāng)免疫系統(tǒng)中起協(xié)調(diào)作用的CD4+T淋巴細(xì)胞被HIV破壞后其數(shù)量大幅度下降，人體由于失去抵抗能力而感染其他的疾病導(dǎo)致死亡。臨床表現(xiàn)為機(jī)體抵抗疾病的能力逐漸下降，直到完全失去，最后病人死于一種或數(shù)種機(jī)會(huì)性感染疾病或者腫瘤。
　　在免疫系統(tǒng)中，CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T

2、細(xì)胞可通過細(xì)胞直接接觸及分泌細(xì)胞因子等機(jī)制調(diào)節(jié)天然及獲得性免疫系統(tǒng)的功能，控制針對自身抗原反應(yīng)的T細(xì)胞過度生長，對于維持免疫耐受及穩(wěn)態(tài)具有重要作用。HIV感染中持續(xù)抗原刺激、組織損傷及不成熟狀態(tài)DC的產(chǎn)生等可誘導(dǎo)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞產(chǎn)生，從而影響機(jī)體針對HIV的免疫應(yīng)答。有研究表明，HIV感染可導(dǎo)致CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)量的變化。
　　PD-1/PD-L介導(dǎo)負(fù)性協(xié)同刺激信號(hào)，主要表達(dá)于T、B和單核等淋巴細(xì)胞表面

3、，發(fā)揮抑制免疫功能的作用。業(yè)已發(fā)現(xiàn)，T細(xì)胞活化除必須有抗原信號(hào)激發(fā)外還必須獲得協(xié)同刺激信號(hào)。免疫細(xì)胞所獲得的正性和負(fù)性協(xié)同刺激信號(hào)需要達(dá)到相對平衡以使免疫應(yīng)答適時(shí)開啟又能恰當(dāng)終止。PD-1/PD-L途徑介導(dǎo)的負(fù)性信號(hào)能有效抑制T、B細(xì)胞功能，在機(jī)體免疫應(yīng)答后期的負(fù)性調(diào)節(jié)中發(fā)揮了至關(guān)重要的作用，并在腫瘤免疫、自身免疫、移植免疫和感染性疾病的發(fā)生中具有重要的生物學(xué)意義。
　　本研究通過對艾滋病患者外周血進(jìn)行CD3+、CD4+、CD8+

4、、CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的表達(dá)分析，并根據(jù)CD4+T細(xì)胞的絕對數(shù)進(jìn)行了相關(guān)性的研究，從而探討患者體內(nèi)Treg比例、CD4+T細(xì)胞數(shù)量與HIV感染機(jī)率和病情進(jìn)展的關(guān)系。與此同時(shí)，應(yīng)用免疫熒光和單克隆抗體標(biāo)記技術(shù)檢測分析艾滋病患者外周血淋巴細(xì)胞表面PD-1分子的表達(dá)特性，探討該負(fù)性協(xié)同刺激分子在介導(dǎo)艾滋病患者免疫功能中的生物學(xué)意義。
　　目的:分析HIV感染/艾滋病患者外周血中CD4+CD25+high調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的變化及其與

5、CD4+T細(xì)胞的絕對數(shù)的相關(guān)性，探討其與HIV感染機(jī)率和病情進(jìn)展的關(guān)系;分析HIV感染/艾滋病患者外周血淋巴細(xì)胞表面PD-1分子的表達(dá)特性，探討該負(fù)性協(xié)同刺激分子在介導(dǎo)艾滋病患者免疫功能中的生物學(xué)意義。
　　方法:選擇臨床研究對象HIV感染患者100例，同時(shí)以20例健康獻(xiàn)血員作為對照者，應(yīng)用免疫熒光和單克隆抗體標(biāo)記技術(shù)檢測艾滋病患者外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的表達(dá)，比較不同組CD3+、CD4

6、+、CD8+淋巴細(xì)胞占總淋巴細(xì)胞的百分比;并根據(jù)CD4+T細(xì)胞的絕對數(shù)不同進(jìn)行分組，分析CD4+CD25+high、CD4+PD-1+的表達(dá)特性，從而探討患者體內(nèi)Treg比例、CD4+T細(xì)胞數(shù)量與HIV感染機(jī)率和病情進(jìn)展的關(guān)系和艾滋病患者外周血淋巴細(xì)胞表面PD-1負(fù)性協(xié)同刺激分子在介導(dǎo)艾滋病患者免疫功能中的生物學(xué)意義。
　　結(jié)果:(1) HIV感染患者外周血T細(xì)胞亞群表達(dá)紊亂:流式結(jié)果顯示白細(xì)胞中CD3+、CD8+T細(xì)胞表達(dá)均顯著

7、高表達(dá)于健康對照組(p＜0.0001)，CD4+T細(xì)胞則顯著低表達(dá)于健康對照組(p＜0.0001);而淋巴細(xì)胞中CD4+、CD8+T細(xì)胞與對照組間均存在顯著差異(p＜0.0001)，但CD3+T細(xì)胞表達(dá)與對照組無顯著差異(p=0.4528);同樣CD4+、CD8+T細(xì)胞在T細(xì)胞中的表達(dá)與對照組間有顯著差異(p＜0.0001)。(2) CD4絕對計(jì)數(shù)不同組間的T細(xì)胞亞群表達(dá)不同:CD4絕對值＜200/μl、200-500/μl、＞500/

8、μl三組間，CD3+T細(xì)胞表達(dá)無顯著差異;CD4+、CD8+T細(xì)胞亞群在淋巴細(xì)胞中三組間的表達(dá)不同，CD4絕對值＜200/μl組與＞500/μl組間、200-500/μl組與＞500/μl組間有顯著性差異(p=0.0184，0.0052;0.0002，0.0043);CD4絕對值＜200/μl組與200-500/μl組間，淋巴細(xì)胞中CD4+、CD8+T細(xì)胞亞群表達(dá)無顯著差異(p=0.5474，0.5719)。(3)艾滋病患者外周血CD4

9、+PD-1+T細(xì)胞和CD4+CD25+Treg顯著高表達(dá):艾滋病患者外周血CD4+、CD8+T細(xì)胞均顯著高表達(dá)PD-1，與對照組有顯著性差異(p＜0.0001); CD4+PD-1+high與對照組比較亦有顯著差異(p＜0.005);檢測組CD4+CD25+high Treg顯著高表達(dá)于對照組(p＜0.0001)。CD4絕對值＜200/μl組和200-500/μl組的CD4+PD-1+均高于CD4絕對值＞500/μl組。CD4絕對值＜2

10、00/μl組CD4+CD25+high Treg分別與200-500/μl組、＞500/μl組有顯著性差異(p=0.0003，0.0160)。CD4+PD-1+T細(xì)胞和CD4+CD25+highTreg表達(dá)與CD4絕對值成負(fù)性相關(guān)。研究結(jié)果表明艾滋病患者外周血淋巴細(xì)胞亞群、Treg和PD-1表達(dá)異常，細(xì)胞免疫功能紊亂，與HIV感染者疾病發(fā)展進(jìn)程密切相關(guān)。
　　結(jié)論:在HIV感染/艾滋病患者外周血中CD4+CD25+high調(diào)節(jié)性T

11、細(xì)胞的比例與CD4+T細(xì)胞的絕對數(shù)明顯相關(guān)，患者體內(nèi)Treg比例的增加是導(dǎo)致CD4+T細(xì)胞數(shù)量不足、HIV感染機(jī)率增加及病情進(jìn)展的一個(gè)重要原因。此外，進(jìn)一步的分析表明了負(fù)性共刺激分子PD-1在CD4+T細(xì)胞的表達(dá)與CD4+T細(xì)胞的絕對數(shù)也呈明顯相關(guān)性，從而揭示了PD-1的增高表達(dá)是抑制CD4+T的又一個(gè)重要因素。綜上所述，CD4+CD25+Treg及PD-1在CD4+T細(xì)胞上的表達(dá)增加與HIV感染/艾滋病患者外周血中CD4+T的絕對數(shù)呈