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文檔簡介
1、目的:
應用RNA干擾技術抑制PDE5A3基因在人增生前列腺平滑肌細胞中的表達,為臨床應用RNA干擾技術治療BPH/LUTs提供重要的理論依據(jù)。
方法:
制備4個靶向人PDE5A3基因的小發(fā)夾RNA(shRNA)表達質粒,轉染人增生前列腺平滑肌細胞48h后,逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-pCR)及Western blot檢測PDE5A3基因和cGMP的表達抑制效果。
結果:
將重組質粒轉染
2、人增生前列腺平滑肌細胞后,各組轉染效率均超過90%,并成功誘導了RNA干擾。與空白對照和陰性對照組相比,4組shRNA均可在mRNA和蛋白水平降低PDE5A3的表達(P<0.05),其中siPDE5A3-2抑制效果最為明顯:PDE5A3基因在空白對照、陰性對照和siPDE5A3-2組mRNA水平表達分別為1.05±0.06、0.98±0.06和0.41±0.02;在蛋白水平表達分別為0.49±0.04、0.46±0.04和0.18±0.
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