黃芪總苷對脾虛大鼠胃壁細(xì)胞功能及形態(tài)影響的研究.pdf

1、目的：檢測大黃脾虛大鼠壁細(xì)胞內(nèi)鈣調(diào)素Ca2+/CaM活性，并探討AST對其影響。 方法：大鼠壁細(xì)胞的分離與純化采用我室建立的常規(guī)方法，Ca2+/CaM活性檢測采用環(huán)核苷酸磷酸二酯酶(PDE)法[1]。 結(jié)果：脾虛大鼠壁細(xì)胞內(nèi)Ca2+/CaM活性明顯高于正常大鼠；經(jīng)過AST作用后，脾虛大鼠壁細(xì)胞內(nèi)Ca2+/CaM活性均有不同程度的下降，并呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系。 結(jié)論：脾虛大鼠壁細(xì)胞內(nèi)Ca2+/CaM活性的增高，這可能是

2、壁細(xì)胞處于一種代償?shù)臓顟B(tài)。不同劑量的AST可不同程度逆轉(zhuǎn)脾虛大鼠壁細(xì)胞內(nèi)Ca2+/CaM活性的增高，降低高代償?shù)乃健?引言鈣調(diào)素(Calmodulin，CaM)廣泛存在于真核細(xì)胞內(nèi)，參與細(xì)胞許多生理功能的調(diào)控，是胞內(nèi)Ca2+作用的重要靶標(biāo)之一，Ca2+通過與CaM結(jié)合從而激活下游靶酶而發(fā)揮生理功能或作用[2,3]。CaM也作為許多藥物的受體而發(fā)揮藥物的干擾作用，影響CaM的活性是某些藥物作用的重要環(huán)節(jié)。在壁細(xì)胞中，CaM為胃泌

3、素受體后信息傳遞的重要物質(zhì)。 我們之前的研究顯示：大黃脾虛大鼠壁細(xì)胞GR結(jié)合位點數(shù)下降，壁細(xì)胞靜息狀態(tài)下[Ca2+]i明顯低于正常大鼠，經(jīng)過GAS刺激后[Ca2+]i亦明顯低于正常組；采用AST體外孵育對脾虛大鼠壁細(xì)胞下降的GR結(jié)合位點數(shù)有顯著上調(diào)作用，對靜息狀態(tài)下及GAS刺激下[Ca2+]i有一定升高，并呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系。提示脾虛狀態(tài)下壁細(xì)胞受體后胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)在Ca2+這一環(huán)節(jié)上可能存在障礙，而AST有調(diào)節(jié)的作用。本研究在原實

4、驗基礎(chǔ)上對即時分離的脾虛大鼠胃壁細(xì)胞Ca2+/CaM活性進(jìn)行測定，并探討AST的作用。 1材料 1.1試驗藥物AST及大黃液同實驗一。 1.2試劑胃泌素標(biāo)準(zhǔn)品[Leu15]Gastrin-17(Sigma)及鏈霉蛋白酶(pronase，Sigma)、鈣調(diào)素(CaM)、磷酸二酯酶(PDE)標(biāo)準(zhǔn)品(Sigma)、環(huán)磷酸腺苷(cAMP)均由北京鼎國試劑公司提供，孔雀石綠由華美公司提供。 1.3儀器UV-754型

5、紫外分光光度計(上海第三分析儀器廠)，HZS-H恒溫水浴振蕩器(哈爾濱東聯(lián)電子有限公司)，XDS-1倒置顯微鏡(重慶光電儀器廠)，TDZ5-WS低速目的：探討脾虛大鼠胃粘膜表面上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變和AST可能發(fā)揮的作用。方法：采用掃描電鏡觀察脾虛大鼠胃粘膜表面上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化；觀察AST預(yù)防性給藥和治療給藥對其影響。 結(jié)果：脾虛大鼠胃粘膜上皮細(xì)胞壞死、破碎、形態(tài)模糊不完整；細(xì)胞游離面微絨毛稀少、脫落，分泌顆粒稀少；細(xì)胞之

6、間的間隙增寬；多個細(xì)胞融合扭曲成團(tuán)；胃小凹結(jié)構(gòu)不清晰、畸形增寬。AST預(yù)防性給藥和造模之后治療給藥，都能夠扭轉(zhuǎn)脾虛大鼠胃粘膜上皮的病變；并且高劑量預(yù)防組作用優(yōu)于低劑量預(yù)防組。 結(jié)論：脾虛大鼠胃粘膜表面上皮細(xì)胞的完整性受到破壞。其細(xì)胞表面微絨毛稀少、脫落以及分泌顆粒稀少的現(xiàn)象，間接地反映了上皮細(xì)胞分泌中性糖蛋白的功能下降，說明胃粘膜屏障的兩個重要解剖學(xué)基礎(chǔ)受到破壞。AST具有保護(hù)胃粘膜屏障的作用。 引言在胃粘膜的自我保護(hù)中

7、，由緊密排列的上皮細(xì)胞和上皮細(xì)胞分泌的粘液層構(gòu)成的胃粘膜屏障具有重要的防御作用。由于AST對脾虛證胃腸粘膜形態(tài)學(xué)變化具有一定的保護(hù)作用，能夠減輕脾虛大鼠胃、腸粘膜出現(xiàn)的病理改變，本研究繼續(xù)從胃粘膜屏障的變化探討脾虛大鼠胃粘膜上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變和AST可能發(fā)揮的作用。 1材料 1.1藥物同實驗一。AST用生理鹽水配成兩個濃度分別為50、100mg/ml，備用。 1.2動物SPF級SD大鼠，雄性，體重190g～2

8、30g，購自廣東省衛(wèi)生廳實驗動物場，動物合格證號：0010487。 1.3儀器掃描電鏡型號：LEO-1430VP 2方法 2.1動物分組與給藥大鼠飲食不限，適應(yīng)性飼養(yǎng)3d后，隨機(jī)分成5組。正常對照組：每日上午9時、下午4時喂飼蒸餾水1ml/100gBW，同時于上午腹腔注射與AST等體積的生理鹽水一次，連續(xù)14d。脾虛模型組：大鼠灌胃100％大黃液1ml/100gBW，每天兩次，時問同前；同時于上午腹腔注射與AST

9、等體積的生理鹽水一次，連續(xù)14d。脾虛AST預(yù)防組(設(shè)高、低劑量組)：大鼠灌胃100％大黃液1ml/100gBW，每天兩次，時間同前；同時于上午腹腔注射AST一次，劑量分別為100mg/kgBW、200mg/kgBW，連摘要目的：探討脾虛大鼠壁細(xì)胞、主細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變和AST的影響。 方法：采用透射電鏡觀察脾虛大鼠壁細(xì)胞、主細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變，并觀察AST預(yù)防性給藥和治療給藥對其影響。 結(jié)果：脾虛大鼠壁細(xì)胞的分泌小管明

10、顯擴(kuò)張，腔內(nèi)微絨毛數(shù)量稀少、脫落、受壓；微囊泡數(shù)量減少，形態(tài)不規(guī)則；線粒體數(shù)量和形態(tài)正常。主細(xì)胞細(xì)胞核呈不規(guī)則形態(tài)，核萎縮，核內(nèi)異染色質(zhì)增多，常染色質(zhì)減少，核膜與胞質(zhì)之間的間隙增寬、出現(xiàn)空泡；糙面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增寬、擴(kuò)張，核糖體顆粒脫落、減少，酶原顆粒界膜不清晰，線粒體的改變同樣不明顯。AST預(yù)防性給藥及造模之后治療給藥，都能夠扭轉(zhuǎn)脾虛大鼠壁細(xì)胞、主細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的病變。 結(jié)論：脾虛大鼠壁細(xì)胞、主細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)都發(fā)生了明顯的改變，AST預(yù)