健脾活血法對(duì)糖尿病胃輕癱大鼠胃動(dòng)力基本功能單位的影響.pdf

1、目的：鑒于胃的血流是保障胃動(dòng)力順利的關(guān)鍵，因此我們擬通過血流干預(yù)藥物及健脾活血法之代表方“糖胃康”對(duì)糖尿病胃輕癱大鼠胃動(dòng)力基本功能單位(胃壁內(nèi)神經(jīng)系統(tǒng)、Cajal間質(zhì)細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞)的影響，揭示糖尿病胃輕癱發(fā)病的內(nèi)在機(jī)制及血流因素在糖尿病胃輕癱發(fā)病機(jī)制中的作用，并部分明確“糖胃康”治療糖尿病胃輕癱的作用部位、環(huán)節(jié)及分子機(jī)制，為中藥防治糖尿病胃輕癱開辟新方法和理論依據(jù)，為臨床治療糖尿病胃輕癱提供一個(gè)有效的中藥制劑。 方法：131

2、只SPF級(jí)SD雄性大鼠，隨機(jī)分為5組，其中正常組10只、模型組22只、止血敏組33只、蚓激酶組33只和糖胃康組33只。所有動(dòng)物禁食12h后，測空腹血糖，剔除血糖過高或偏離正常值較大的動(dòng)物，稱重。除正常對(duì)照組大鼠外，其它大鼠一次性腹腔注射0.1mmol/L檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液鏈脲佐菌素(STZ)造模，注射劑量60mg/kg，正常對(duì)照組大鼠單次腹腔注射等容量的0.1mmol/L檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。 至造模后第7天，所有實(shí)驗(yàn)大鼠

3、在非禁食情況下剪尾采血，用血糖儀測血糖值，以血糖≥16.7mmol/L為實(shí)驗(yàn)納入標(biāo)準(zhǔn)。符合實(shí)驗(yàn)納入標(biāo)準(zhǔn)大鼠于造模后第10天起，糖胃康組大鼠予“糖胃康”水煎劑灌胃，每日1次；止血敏組大鼠予止血敏注射液灌胃，每日1次；蚓激酶組大鼠予蚓激酶腸溶膠囊腹腔注射，每日1次；模型組和正常組大鼠予等量蒸餾水灌胃，每日1次。每周給藥6天。所給藥物劑量采用不同種屬、不同體重動(dòng)物劑量換算公式計(jì)算，相當(dāng)于成人臨床常用劑量2倍。每天觀察并記錄動(dòng)物一般狀態(tài)(包括飲

4、食、排泄物、分泌物、毛發(fā)、精神狀態(tài)、自主運(yùn)動(dòng)、眼白內(nèi)障、死亡等的變化)。每3周稱體重1次，按新體重重新計(jì)算給藥劑量。實(shí)驗(yàn)期為30周。5組大鼠以復(fù)合顆粒飼料喂養(yǎng)，自由取食、自由飲水。 實(shí)驗(yàn)17周時(shí)所有大鼠用血糖儀檢測空腹血糖1次。30周后所有大鼠禁食24h后，先用血糖儀測空腹血糖，而后各鼠均給予5ml酚紅溶液(1mg/ml)灌胃，30分鐘后乙醚麻醉，開胸，心臟取血6ml，不加抗凝劑，4℃自然凝固后，3500rpm-1離心10分鐘，

5、取上清，-20℃冰箱保存?zhèn)溆?，用于檢測血清胰島素水平、血清C肽水平、血脂(TC、TG、LDL、HDL)及血自由基含量(SOD、MDA)等生化指標(biāo)；取血4ml，加肝素抗凝，37℃條件下測定血液流變學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)。而后拉頸處死大鼠，迅速剖腹，結(jié)扎胃賁門和幽門，取出全胃放置于冰上，沿胃大彎側(cè)剪開胃，將胃內(nèi)殘留物收集，用722光柵分光光度計(jì)以560nm波長下讀取光密度值，計(jì)算大鼠胃液體排空率。隨即取大鼠胃竇區(qū)組織2塊，大小約1.0cm×1.0cm，

6、其中1塊放入10％中性甲醛固定液中，另1塊放入4％多聚甲醛固定液中固定，而后脫水、透明、石蠟包埋、切片、拷片、行HE染色、特殊染色(Masson染色、Mallory染色、甲苯胺藍(lán)染色)和免疫組化染色，光鏡下觀察胃組織微血管形態(tài)和微血管密度變化，胃竇肌間神經(jīng)叢中神經(jīng)元細(xì)胞數(shù)、神經(jīng)元內(nèi)尼氏小體的變化，胃竇組織神經(jīng)遞質(zhì)SP、VIP、5-HT、nNOS變化，胃竇組織Cajal間質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)及數(shù)量變化，胃竇組織平滑肌細(xì)胞形態(tài)變化、平滑肌細(xì)胞凋亡以

7、及凋亡調(diào)控基因Bcl-2和Fax基因蛋白的表達(dá)；另取大鼠胃竇區(qū)組織1塊，大小約0.5cm×0.5cm，立即置含0.2％戊二醛、4％多聚甲醛的磷酸緩沖液固定，進(jìn)行透射電鏡制樣，電鏡下觀察胃竇組織Cajal間質(zhì)細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、壁內(nèi)神經(jīng)系統(tǒng)和微血管超微結(jié)構(gòu)改變以及Cajal間質(zhì)細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和壁內(nèi)神經(jīng)系統(tǒng)三者之間的關(guān)系。取胰尾腺體組織，10％甲醛溶液固定，而后脫水、透明、石蠟包埋、切片、拷片、行HE染色和醛品紅-亮綠橙黃G染色，光鏡下觀察

8、胰島和胰島β細(xì)胞變化。 結(jié)果：1.大鼠糖尿病和糖尿病胃輕癱模型的建立及血流干預(yù)藥物和“糖胃康”對(duì)它們的影響本實(shí)驗(yàn)造模前各組大鼠血糖水平和體重?zé)o差異，造模7天后，正常組大鼠血糖均值為3.20mmol/L，造模組血糖≥16.7mmol/L的111只大鼠血糖在16.72-24.1mmol/L 結(jié)論：1.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，血流變化因素與糖尿病胃輕癱發(fā)病機(jī)理間存在一定的關(guān)系，但不是主要的發(fā)病機(jī)制。在治療時(shí)或許可通過改善微循環(huán)而達(dá)到促

9、進(jìn)胃動(dòng)力的作用。 2.我們推測糖尿病胃輕癱的發(fā)病機(jī)制可能為糖尿病發(fā)生時(shí)，由于糖代謝障礙、高脂血癥及血漿纖維蛋白原增加，導(dǎo)致血液流變性異常，這使胃腸道微血管管壁增厚，結(jié)構(gòu)受到破壞，血流淤滯，造成胃腸道缺血，致使Cajal間質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、黏膜細(xì)胞缺血，能量供應(yīng)減少，能量匱乏，引致細(xì)胞膜系統(tǒng)受損，胞質(zhì)溶解，線粒體腫脹，空泡樣變，從而使這些細(xì)胞的功能嚴(yán)重受損以及破壞了肌間神經(jīng)叢多種神經(jīng)遞質(zhì)的平衡，促使糖尿病時(shí)胃腸道的并發(fā)

10、癥出現(xiàn)。其中胃腸動(dòng)力基本功能單位的病理改變和(或)功能異?？赡苁翘悄虿∥竸?dòng)力障礙發(fā)生的關(guān)鍵性局部機(jī)制。 3.本研究結(jié)果表明，“糖胃康”具有降血糖和促進(jìn)胃動(dòng)力雙重作用，是一個(gè)對(duì)糖尿病胃輕癱治療有確切療效的中藥制劑。我們推測“糖胃康”治療糖尿病胃輕癱的機(jī)理可能是通過其降糖，降脂，改善血液流變性，促進(jìn)血液循環(huán)，增加血流量，使胃腸道的微血管、Cajal間質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞的病變改善，胃腸道局部興奮性神經(jīng)遞質(zhì)SP和(或)5-HT