膽道閉鎖肝內(nèi)外膽系的組織學(xué)與臨床預(yù)后相關(guān)性分析.pdf

1、膽道閉鎖(Biliary atresia,BA)是新生兒膽汁郁積最常見的原因，病因尚不明確，預(yù)后差。其病理改變是探討B(tài)A發(fā)病機(jī)制和臨床轉(zhuǎn)歸的關(guān)鍵，肝門的病變可能是整個病變的起點。本研究擬通過膽道閉鎖患兒肝門纖維塊和肝臟組織的病理和超微結(jié)構(gòu)觀察，結(jié)合免疫組化染色，分析其與膽道閉鎖病人臨床轉(zhuǎn)歸的相關(guān)性，旨在進(jìn)一步探討膽道閉鎖的發(fā)病機(jī)制和指導(dǎo)臨床治療。 第一部分膽道閉鎖肝內(nèi)外膽系組織學(xué)病理形態(tài)分析 目的： 對早期BA肝

2、組織及肝門纖維塊進(jìn)行病理形態(tài)觀察；應(yīng)用電子顯微鏡分析BA肝組織內(nèi)細(xì)胞器的特征，并對肝門成纖維細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行分化程度評分，進(jìn)而與肝組織纖維化進(jìn)行相關(guān)分析。旨在進(jìn)一步對膽道閉鎖肝內(nèi)外膽系組織學(xué)病理形態(tài)進(jìn)行深入研究。 方法： 收集2005年7月～2006年5月復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院21例膽道閉鎖Kasai根治術(shù)病例，平均手術(shù)年齡66±20天，術(shù)中取肝門纖維塊及肝臟組織標(biāo)本。對照組為5例膽汁淤積和10例膽總管囊腫，留取肝臟組織標(biāo)本。

3、在光鏡和電鏡下觀察標(biāo)本的病理改變。肝組織學(xué)纖維化分級采用三級分級法。透射電鏡為Phillip CM-120，超微結(jié)構(gòu)變化內(nèi)容包括肝細(xì)胞、毛細(xì)膽管、肝門成纖維細(xì)胞、細(xì)胞器結(jié)構(gòu)改變。肝門成纖維細(xì)胞活躍程度分級：(1)成纖維細(xì)胞幼稚型：大于50％成纖維細(xì)胞幼稚(2)成纖維細(xì)胞老化型：大于50％成纖維細(xì)胞衰老(3)中等：介于上述情況之間。采用SPSS14.0 軟件，半定量比較膽道閉鎖與對照組肝臟纖維化的差異，檢驗?zāi)懙篱]鎖肝門纖維塊成纖維細(xì)胞活躍

4、程度與肝纖維化分級相關(guān)性。 結(jié)果： 1，早期BA肝組織病理改變主要是肝內(nèi)門脈區(qū)膽管炎癥及纖維化形成，三級評分系統(tǒng)分析BA肝纖維化程度明顯高于同年齡膽汁淤積和膽總管囊腫患兒。 2，BA肝門病理表現(xiàn)為毛細(xì)膽管增生，部分管腔閉鎖，部分狹窄，管腔內(nèi)炎細(xì)胞浸潤及部分淤膽，大量間質(zhì)成分增生。 3，BA 電鏡下組織學(xué)特征是肝門成纖維細(xì)胞活躍、肝臟毛細(xì)膽管上皮微絨毛缺失、肝細(xì)胞及肝血竇內(nèi)電子致密物質(zhì)增多及毛細(xì)膽管擴(kuò)張。

5、 4，BA肝門纖維塊的成纖維細(xì)胞分化程度與肝組織纖維化程度相關(guān)(P=0.04)。 結(jié)論： BA肝組織病理改變主要是肝內(nèi)門脈區(qū)膽管炎癥及纖維化形成，其纖維化程度明顯高于同年齡膽汁淤積和膽總管囊腫患兒；BA超微結(jié)構(gòu)改變主要體現(xiàn)在肝門組織成纖維細(xì)胞活躍、毛細(xì)膽管上皮微絨毛缺失、肝細(xì)胞及肝血竇內(nèi)電子致密物質(zhì)增多等，肝門纖維塊的成纖維細(xì)胞分化程度與肝纖維化程度相關(guān)。 第二部分膽道閉鎖肝內(nèi)外膽系免疫組化研究與臨床預(yù)后相

6、關(guān)性分析 目的： 測定BA肝組織和肝門纖維塊CD68、MCP-1和ICAM含量，了解其在發(fā)病過程的重要性和相關(guān)性。檢測α—SMA，體現(xiàn)BA肝組織和肝外膽系的病變程度。肝內(nèi)外組織免疫炎性改變與臨床預(yù)后相關(guān)分析，旨在尋找提示預(yù)后指標(biāo)。 方法： 病例收集同第一部分。采用鼠兔二步法免疫組化染色方法對膽道閉鎖和對照組肝組織、肝門纖維塊進(jìn)行CD68、MCP-1、ICAM 和SMA 染色。選用LEICA DM研究級生物

7、顯微鏡，QWIN 軟件環(huán)境下測量抗體陽性細(xì)胞面積百分比和平均光密度。隨訪19例BA患兒術(shù)后3月直接膽紅素下降比率，分別與肝組織CD68、MCP-1、ICAM和α—SMA表達(dá)量進(jìn)行相關(guān)性分析。數(shù)據(jù)分析采用SPSS14.0軟件，分析膽道閉鎖肝門纖維塊與肝臟組織CD68、CD54、ICAM、α—SMA的相關(guān)性；比較膽道閉鎖與對照組上述指標(biāo)的差異性，進(jìn)行T檢驗、方差分析。 結(jié)果： 1，CD68表達(dá)在匯管區(qū)巨嗜細(xì)胞及Kupffer

8、細(xì)胞胞漿內(nèi)，BA肝組織內(nèi)表達(dá)較對照組更強(qiáng)，但肝門纖維塊表達(dá)不常見；MCP-1表達(dá)在BA肝臟膽管上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞及肝細(xì)胞，肝門纖維塊鮮有表達(dá)，對照組僅有輕度表達(dá)；ICAM在BA肝組織表達(dá)更強(qiáng)，主要分布在增生的膽小管、小葉間膽管，以及匯管區(qū)附近的肝細(xì)胞胞漿內(nèi)；α—SMA在BA纖維塊高度表達(dá)于膽管上皮、膽管周圍的膠原纖維。 2，CD68、MCP-1、ICAM、α—SMA陽性表達(dá)量和表達(dá)強(qiáng)度明顯高于對照組，其中ICAM最為顯著。除

9、了MCP-1外，CD68、ICAM、α—SMA在肝臟表達(dá)的表達(dá)量與表達(dá)強(qiáng)度呈線性正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別是r=0.838，P=0.0002(CD68)；r=0.565，P=0.035(ICAM)：r=0.549，P=0.022(α—SMA)。BA肝臟α—SMA 表達(dá)量與肝臟纖維化程度正相關(guān)(P=0.02)。 3，BA 肝臟CD68和α—SMA陽性表達(dá)面積百分比與術(shù)后3月直接膽紅素下降率呈負(fù)相關(guān)，r=-0.645，P=0.023(CD