紫杉醇節(jié)律化療的抗Lewis肺癌血管生成作用.pdf

1、腫瘤治療的基本手段有外科手術(shù)、放療和化療，近幾十年取得了一定進(jìn)展。其中化學(xué)藥物治療是腫瘤治療中發(fā)展最快的一個領(lǐng)域，大量的針對不同靶點(diǎn)的新藥開始應(yīng)用于臨床，對藥物作用機(jī)制及藥代動力學(xué)研究的進(jìn)展，也使臨床給藥途徑與方式更加適合于殺傷腫瘤細(xì)胞、保護(hù)正常組織。抗血管生成治療的提出又為惡性腫瘤的治療開辟了一個新領(lǐng)域，因其高效、低毒、不易發(fā)生耐藥等優(yōu)點(diǎn)，日益成為人們研究的熱點(diǎn)。1971年，F(xiàn)olkman第一次提出針對腫瘤血管生成的靶向治療策略后，人

2、們開始研究化療藥物的抗血管生成作用。近期研究發(fā)現(xiàn)，某些細(xì)胞毒性藥物的確能抑制血管生成過程，尤其是低劑量、高頻率給藥時，與MTD化療伴一較長間歇期的給藥方式相比，低劑量、高頻率或持續(xù)給藥對腫瘤血管內(nèi)皮的靶向作用更強(qiáng)。這種類型的化療方案稱為“節(jié)律化療”或“抗血管生成化療”。 王云等發(fā)現(xiàn)用CTX對小鼠Lewis肺癌進(jìn)行節(jié)律化療后腫瘤血管密度明顯減少，瘤體與正常組織之間形成了一個完整的假性包膜，炎癥細(xì)胞浸潤和間質(zhì)反應(yīng)與未治療的對照組和常

3、規(guī)化療組都有明顯差別。為什么節(jié)律化療后腫瘤組織出現(xiàn)了上述的變化呢?推測節(jié)律化療可通過抑制炎癥反應(yīng)而間接發(fā)揮其抗血管生成作用。 巨噬細(xì)胞是腫瘤組織間質(zhì)成分的重要組成部分?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)在腫瘤部位有大量的巨噬細(xì)胞浸潤，這些浸潤的巨噬細(xì)胞對腫瘤生長速度、血管生長、基質(zhì)形成及溶解均有影響。許多研究證實(shí)，NF-кB通過調(diào)節(jié)眾多基因的轉(zhuǎn)錄參與多種生理、病理過程的調(diào)節(jié)，是聯(lián)系炎癥和腫瘤的關(guān)系的重要分子，在腫瘤血管新生中發(fā)揮核心的作用。

4、為證實(shí)以上推測，本實(shí)驗(yàn)以荷Lewis肺癌的C57BL/6小鼠為模型，初步探討常用化療藥物紫杉醇(Paclitaxd)節(jié)律化療抑制腫瘤血管生成的作用，比較節(jié)律化療與MTD化療對腫瘤的控制情況及其毒副反應(yīng)，同時觀察小鼠腫瘤組織中微血管和巨噬細(xì)胞、NF-<,к>B蛋白的表達(dá)以明確節(jié)律化療是否可通過抑制局部炎癥反應(yīng)而間接發(fā)揮其抗血管生成作用。方法建立C57BL/6小鼠荷Lewis肺癌模型后，隨機(jī)分為以下三組：①節(jié)律組腹腔注射紫杉醇(PTX)15

5、mg/kg，隔天一次；②MTD組腹腔注射紫杉醇(PTX)100mg/kg，第1d，21d為一周期；③對照組。腹腔注射生理鹽水0．2mL，隔天一次。每組10只小鼠。以上各組均于接種后第6d(皮下腫瘤約100～200mm<'3>)開始給藥，每日觀察小鼠飲食、活動及一般狀況。接種后第25d全部斷頸處死小鼠。實(shí)驗(yàn)過程中，連續(xù)測量腫瘤體積和小鼠體重，分別繪制腫瘤生長曲線和小鼠體重變化曲線，觀察各組的抑瘤效果及毒副作用。處死小鼠后稱瘤重，用免疫組化

6、方法測定各組腫瘤組織的微血管密度(MVD)及巨噬細(xì)胞(CD68)、核轉(zhuǎn)錄因子．rB(NF-<,к>B)表達(dá)情況，并進(jìn)行常規(guī)組織學(xué)觀察。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS10．0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，計量資料采用方差分析，計數(shù)資料采用x<'2>檢驗(yàn)，巨噬細(xì)胞數(shù)和MVD值之間的關(guān)系采用Pearson相關(guān)分析，以α=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。 結(jié)果 1．PTX節(jié)律化療組腫瘤生長曲線較平緩，但早期與對照組差別不大；MTD組腫瘤生長曲線在治療后短

7、期內(nèi)下降，間歇期內(nèi)又回升；對照組腫瘤生長曲線較陡直。 2．PTX節(jié)律化療組小鼠未出現(xiàn)明顯體重下降，且小鼠的一般狀況最好；MTD組小鼠在給藥完成后一周內(nèi)出現(xiàn)體重明顯下降、行動遲緩、反應(yīng)遲鈍及皮毛失去光澤等毒副作用，于接種后第22d死亡一只，后期體重有所回升；對照組小鼠體重逐漸增加，后期腫瘤負(fù)荷較大，體重下降，接種后第20d和第23d各死亡一只。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，對照組、節(jié)律組和MTD組的平均瘤重分別為(4．26±0．36)g、(1．87

8、±0．59)g、(2．02±0．34)g。 3．肉眼觀察大體標(biāo)本，對照組及MTD組腫瘤假膜不完整，瘤組織顏色紅潤、質(zhì)脆；節(jié)律組瘤塊假膜完整，瘤組織顏色蒼白、質(zhì)韌。 4．對照組、節(jié)律組和MTD組的微血管密度分別為26．38±2．56、15．10±2．06和23．51±2．78。節(jié)律組的微血管密度比對照組和MTD組顯著下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；MTD組的微血管密度與對照組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

9、5.對照組、節(jié)律組和MTD組的巨噬細(xì)胞計數(shù)分別為50.78±3.72、35.47±4.26和48.05±386。節(jié)律組的巨噬細(xì)胞計數(shù)比對照組和節(jié)律組顯著下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)：MTD組的巨噬細(xì)胞計數(shù)與對照組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(.P>0.05)。節(jié)律組微血管計數(shù)和巨噬細(xì)胞計數(shù)Pearson相關(guān)系數(shù)Y為0.953，P<0.05。6.節(jié)律組NF-κB在腫瘤組織中的表達(dá)較對照組和MTD組顯著下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.0

10、5)；對照組NF-κB在腫瘤組織中的表達(dá)和MTD組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論1.紫杉醇節(jié)律化療能有效抑制Lewis肺癌的生長，抑瘤效果好于MTD化療。 2.紫杉醇節(jié)律化療的毒副作用較MTD化療小，可改善荷Lewis肺癌小鼠的生存狀況。 3.紫杉醇節(jié)律化療可顯著抑制Lewis肺癌腫瘤的血管生成。 4.紫杉醇節(jié)律化療后小鼠腫瘤組織中的NF-κB蛋白表達(dá)下降，巨噬細(xì)胞的數(shù)量亦減少，可能與節(jié)律化療抗血管