大腸癌分化差異表達(dá)基因MAGEA3與分化差異表達(dá)CRC-EST1的初步研究.pdf

1、大腸癌(colorectalcancer，CRC)是嚴(yán)重威脅人類健康的主要腫瘤之一，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。隨著分子生物學(xué)研究的不斷深入，腫瘤確認(rèn)為一種基因病，癌基因的激活與抑癌基因的失活是其發(fā)生發(fā)展的內(nèi)在本質(zhì)。隨著后基因組時(shí)代的到來，國(guó)內(nèi)外應(yīng)用具有高度并行性、高通量、微型化和自動(dòng)化特色的基因芯片技術(shù)對(duì)大腸癌基因表達(dá)譜進(jìn)行了較多研究，使大腸癌相關(guān)基因數(shù)據(jù)庫(kù)不斷豐富。然而，這些研究?jī)H限于基因表達(dá)譜數(shù)據(jù)的初步挖掘，對(duì)篩得的大腸癌相關(guān)基因尚缺

2、乏后續(xù)的研究報(bào)道，未形成系統(tǒng)性研究。 本課題是許紅民等“不同分化程度大腸癌的基因表達(dá)譜分析”課題的延伸。許紅民等首次應(yīng)用美國(guó)Affymetrix公司制備的HG-U133原位合成寡核苷酸芯片(含迄今所知的人類全基因共計(jì)32264個(gè)，包括19308個(gè)已知的人類基因和12956個(gè)EST簇)技術(shù)，以相應(yīng)正常大腸粘膜組織為對(duì)照，對(duì)不同分化程度大腸癌組織進(jìn)行基因水平系列研究，篩查得到一系列大腸癌分化差異表達(dá)基因及ESTs。其中，MAGEA3

3、為最重要的大腸癌分化差異表達(dá)基因；Affymetrix芯片編號(hào)為233399xat、RepresentativePublicID為AU145662的EST(本論文暫命名為CRC-EST1)為較重要的大腸癌分化差異表達(dá)ESTs之一。 本研究采用的主要實(shí)驗(yàn)方法和步驟： 1.應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)，觀察MAGEA3在大腸癌組織中的表達(dá)； 2.結(jié)合臨床病理資料，探討MAGEA3表達(dá)的臨床意義； 3.應(yīng)用RT-P

4、CR技術(shù)，考察CRC-EST1在大腸癌組織和相應(yīng)正常大腸粘膜、肺組織及子宮內(nèi)膜中的表達(dá)； 4.應(yīng)用RACE技術(shù)，釣取該EST的3’端。 本課題的研究結(jié)果如下： 1.免疫組化染色顯示，101例大腸癌標(biāo)本中，MAGEA3陽(yáng)性率為31.7％；比較MAGEA3蛋白在大腸癌高、中、低不同分化組的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)MAGEA3蛋白在大腸癌組織中的表達(dá)與分化程度有關(guān)，低分化組表達(dá)陽(yáng)性率及陽(yáng)性強(qiáng)度均高于其它兩組(p＜0.05)，此結(jié)果與

5、芯片結(jié)果基本一致。 2.臨床病理資料分析提示，MAGEA3的表達(dá)與大腸癌的Dukes分期、腫瘤大小、發(fā)生部位、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、患者年齡、性別等無關(guān)；多因素分析證實(shí)Dukes分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移對(duì)患者生存期的影響具有預(yù)后提示作用，分期越高患者生存時(shí)間越短(p＜0.05)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者其生存時(shí)間短(p＜0.05)。 3.RT-PCR方法證實(shí)，CRC-EST1可在大腸癌組織、正常大腸粘膜、肺組織及子宮內(nèi)膜中表達(dá)；應(yīng)用RACE技術(shù)，成功