TNF-α和MMP-3在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)與發(fā)病的關(guān)系.pdf

1、子宮內(nèi)膜異位癥(Ems)，簡(jiǎn)稱內(nèi)異癥，雖是良性疾病，但有惡性腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和侵襲的特性。近年來(lái)更多的學(xué)者關(guān)注于內(nèi)異癥在位子宮內(nèi)膜的生物學(xué)特性，在位子宮內(nèi)膜在宮腔以外生長(zhǎng)，需要降解細(xì)胞外基質(zhì) (ECM)和基底膜（BM），并生成新的血管以供給異位內(nèi)膜生長(zhǎng)所必須的營(yíng)養(yǎng),使Ems進(jìn)一步進(jìn)展。腫瘤壞死因子（TNF-α）能夠促進(jìn)血管內(nèi)皮生成因子（VEGF）的生成，形成新的血管,基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP-3)能降解ECM，使異位內(nèi)膜更具侵襲性,最終導(dǎo)致

2、Ems的發(fā)生發(fā)展。本文就TNF-α和MMP-3與Ems的關(guān)系做一論述，分兩部分進(jìn)行論述。
　　 第一部分
　　 目的：探討MMP-3在Ems患者在位、異位內(nèi)膜和子宮肌瘤患者內(nèi)膜中的表達(dá)，探討其在Ems發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　 方法：以Ems患者（病變位于卵巢，形成巧克力囊腫）40例作研究組,其中增生期20例，分泌期20例，征得患者同意，術(shù)前刮取患者在位子宮內(nèi)膜，術(shù)后留取異位囊腫的囊壁。以子宮肌瘤患者40例內(nèi)膜為對(duì)

3、照組，其中增生期20例，分泌期20例。兩組患者術(shù)前3月均未用甾體激素治療。術(shù)后病理組織學(xué)檢查證實(shí)為子宮內(nèi)膜異位癥和子宮平滑肌瘤。所取標(biāo)本經(jīng)中性福爾馬林液固定后石蠟包埋，待用。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組子宮內(nèi)膜中的MMP-3采用免疫組化SABC方法測(cè)定，每批實(shí)驗(yàn)均同時(shí)設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照。檢測(cè)結(jié)果每一個(gè)標(biāo)本的取樣和分級(jí)都由病理科經(jīng)驗(yàn)豐富的兩位醫(yī)生在顯微鏡下進(jìn)行，并實(shí)行雙盲。切片被第一個(gè)觀測(cè)者打分，然后被第二個(gè)觀測(cè)者證實(shí)。選取切片中有異位子宮內(nèi)膜腺體

4、者，腺上皮細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞胞漿中出現(xiàn)棕黃色或褐色顆粒為陽(yáng)性。根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度和染色細(xì)胞所占百分率的得分之和除以2進(jìn)行評(píng)估：(1)陽(yáng)性細(xì)胞百分率:無(wú)細(xì)胞顯色或陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<5％為0；5％-35％細(xì)胞顯色為1；36％-65％細(xì)胞顯色為2；＞65％細(xì)胞顯色為3；(2)顯色深淺：不顯色或顯色不清為0；淺黃色為1；棕黃色為2；深褐色為3。將二者的評(píng)分相加除以2，作為該切片的最終評(píng)分：將0、0-1、1.5 -3分分別定為陰性(-)、陽(yáng)性(+)、強(qiáng)陽(yáng)性(

5、++)。分析結(jié)果采用SPSS11.5軟件進(jìn)行兩樣本秩和檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有顯著性。
　　 結(jié)果：MMP-3主要定位于子宮內(nèi)膜的腺上皮細(xì)胞及內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的胞漿中。在異位內(nèi)膜中，其陽(yáng)性染色強(qiáng)度均較強(qiáng)，以(+)-(++)為主，呈棕黃色或棕揭色，明顯強(qiáng)于子宮肌瘤內(nèi)膜(P＜0.05)，差異有顯著性。MMP-3在Ems患者異位內(nèi)膜中的染色強(qiáng)度也強(qiáng)于在位內(nèi)膜，(P＜0.05)，差異有顯著性。MMP-3在正常子宮內(nèi)膜組中增殖期的表達(dá)強(qiáng)于

6、分泌期(P＜0.05)，差異有顯著性。
　　 結(jié)論：Ems患者異位子宮內(nèi)膜MMP-3的表達(dá)明顯較對(duì)照組高，且高于同一患者在位子宮內(nèi)膜中MMP-3的表達(dá)，說(shuō)明異位子宮內(nèi)膜降解ECM、BM的能力增強(qiáng)，更富有侵襲力，向黏附部位的深層浸潤(rùn)，使Ems進(jìn)一步發(fā)展。
　　 第二部分
　　 目的：測(cè)定TNF-α和MMP-3在Ems患者血清中的含量，探討TNF-α和MMP-3在Ems發(fā)病機(jī)制中的作用及與疾病的關(guān)系。
　　

7、方法：入選對(duì)象為第一部分的患者，同時(shí)抽取實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組患者術(shù)前清晨空腹肘靜脈血3ml，室溫靜置2 h后,臺(tái)式離心儀2500轉(zhuǎn)，5分鐘分離血清，Eppendorf管分裝，貯存于-80℃冰箱中，待測(cè)。采用ELISA法，嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明的實(shí)驗(yàn)步驟檢測(cè)，儀器為芬蘭生產(chǎn)的Labsystems wellscan K3全自動(dòng)酶標(biāo)儀，波長(zhǎng)450 nm，根據(jù)試劑盒內(nèi)給的標(biāo)準(zhǔn)品，配制好濃度，在450 nm 的酶標(biāo)儀上讀出OD值（讀出的每一個(gè)OD值應(yīng)該減去0

8、孔對(duì)應(yīng)的OD值），應(yīng)用EXCEL計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)的方程，然后根據(jù)OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線算出相應(yīng)的TNF-α和 MMP-3的濃度。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS11.5軟件進(jìn)行兩樣本t檢驗(yàn)。
　　 結(jié)果：TNF-α在實(shí)驗(yàn)組血清中的含量明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)，差異有顯著性。MMP-3在實(shí)驗(yàn)組血清中的含量也明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)，差異有顯著性。
　　 結(jié)論：一方面TNF-α通過(guò)自身炎性細(xì)胞因子的作用加速Ems的發(fā)生發(fā)展，誘導(dǎo)腹腔