竹葉椒和簕欓的化學成分及竹葉椒鎮(zhèn)痛抗炎活性研究.pdf

1、花椒屬是蕓香科分布最廣的一屬，主要分布在亞洲、非洲、美洲、大洋洲的熱帶和亞熱帶地區(qū)。我國有39種，14個變種。在我國民間，竹葉椒(Zanthoxylumarmatum)被用于治療腹痛、牙痛等;簕欓(Z.avicenna)有活血止痛的功效。
　　疼痛是一種復雜的生理心理活動，是臨床上最常見的癥狀之一。鎮(zhèn)痛藥物在人們的日常生活中使用的非常普遍。文獻研究顯示花椒屬植物中木脂素和生物堿類化合物有抗炎、鎮(zhèn)痛方面的活性，因此從花椒屬植物中尋找

2、具有鎮(zhèn)痛活性的新化合物引起了研究者的廣泛關注。
　　第一部分、植物化學研究
　　用常規(guī)的柱層析(CC)、制備薄層層析(PTLC)、重結(jié)晶等手段對竹葉椒和簕欓的化學成分進行了分離，并用UV、IR、MS、1H-NMR、13C-NMR、DEPT、2D-NMR、CD等光譜手段鑒定化合物的結(jié)構(gòu)。
　　竹葉椒的根莖采集于廣西南寧，從其乙酸乙酯部位共分離得到了48個化合物，鑒定了其中的41個。包括20個雙四氫呋喃木脂素，4個三萜，2

3、個甾體，5個異喹啉類和2個喹啉類生物堿，4個苯的衍生物，2個香豆素，1個脂肪酸和1個烷烴。其中armatumin(Ⅰ-5)和armatunine(Ⅰ-39)為新化合物。去-N-甲基-白屈菜紅堿(Ⅰ-7)，isodecaline(Ⅰ-8)，羽扇豆醇(Ⅰ-13)，pinoresinol-di-3，3-dimethylally lether(Ⅰ-19),N-nomitidine(Ⅰ-20),methylxanthoxylol(Ⅰ-22),5'

4、-demethoxyepiexcelsin(Ⅰ-23)，對羥基苯甲酸(Ⅰ-24)， demethoxyaschantin(Ⅰ-25)，epiaschantin(Ⅰ-29),piperitol(Ⅰ-30), pinoresinol-3,3-dimethylallylether(Ⅰ-31),6-acetonyldihydrochelery-thrine(Ⅰ-41)，這13個化合物為首次分離，其中Ⅰ-23和Ⅰ-29為首次從蕓香科中分離得到。<

5、br>　　簕欓的根莖采集于廣西南寧，從其乙酸乙酯部位分離到16個化合物，鑒定了其中的9個，它們分別是香豆素(avicennin，Ⅱ-1;Luvangetin，Ⅱ-8;Xanthoxyletin，Ⅱ-9)、甾體(β-谷甾醇，Ⅱ-2)、三萜（α-香樹脂醇，Ⅱ-5;β-香樹脂醇，Ⅱ-6;羽扇豆醇，Ⅱ-7)、生物堿(去-N-甲基-白屈菜紅堿，Ⅱ-3)和苯的衍生物(鄰苯二甲酸二異丁酯，Ⅱ-4)。其中Ⅱ-2到Ⅱ-9，這8個化合物是首次從該植物中分離

6、得到。
　　第二部分、HPLC方法鑒定竹葉椒乙酸乙酯部位的主要成分
　　流動相:乙腈-水。洗脫條件:0-20min，30％-50％乙腈;20-35min，50％乙腈;35-50min，50％-90％乙腈;50min-57min，90％乙腈。流速:1ml/min。檢測波長:233nm。乙酸乙酯部位主要的峰達到了基線分離，鑒定了其中8個主要色譜峰。它們分別是eudesmin，horsfieldin，(-)-fargesin，ko

7、busin，sesamin，L-asarinin，planispine A和pinoresinol-di-3,3-dimethylallyl。
　　第三部分、抗炎鎮(zhèn)痛藥理作用研究
　　第一節(jié)、體內(nèi)試驗
　　藥理活性研究主要采用經(jīng)典的動物行為學模型，包括醋酸扭體試驗、福爾馬林試驗、熱板法和二甲苯致炎法。選擇民間長期使用、臨床療效確定的竹葉椒進行研究。對中草藥竹葉椒進行活性跟蹤，依次對其乙醇提取物，各個溶劑萃取部位，不同劑

8、量的乙酸乙酯部位及其四個流份，以及部分單體化合物的鎮(zhèn)痛和抗炎作用展開研究，得到以下幾個主要的結(jié)果:
　　1)竹葉椒的乙醇粗提物在三種鎮(zhèn)痛模型上都表現(xiàn)出了鎮(zhèn)痛活性。尤其在醋酸扭體試驗和福爾馬林試驗的第二相，所有被選擇的劑量均表現(xiàn)出顯著性。
　　2)阿片受體拮抗劑納洛酮顯著的拮抗了竹葉椒粗提物對福爾馬林第一相的鎮(zhèn)痛作用，并對第二相也有一定的抑制性。
　　3)在竹葉椒各個溶劑萃取部位鎮(zhèn)痛活性篩選中，乙酸乙酯部位的鎮(zhèn)痛作用最強

9、(P＜0.001)，其它部位也表現(xiàn)出一定的鎮(zhèn)痛作用（P＜0.05）;
　　4)三種所選動物模型中，不同劑量(800，400，200，100mg/kg)的乙酸乙酯部位，均有很好的抗炎和鎮(zhèn)痛活性。
　　5)對乙酸乙酯的幾個流份進行鎮(zhèn)痛研究，隨著極性增大其鎮(zhèn)痛作用呈現(xiàn)逐漸減弱的趨勢。相同劑量下，乙酸乙酯各個流份對小鼠扭體次數(shù)的抑制率要弱于總乙酸乙酯部位。
　　6)在醋酸扭體動物試驗中，芝麻素在80 mg/kg，去-N-甲基-

10、白屈菜紅堿在20、40 mg/kg時表現(xiàn)出顯著的鎮(zhèn)痛效果。在小鼠耳腫脹試驗中，(-)-fargesin在80mg/kg、(-)-yangambin在30mg/kg時表現(xiàn)出顯著的抗炎作用。
　　根據(jù)以上研究結(jié)果，得出如下結(jié)論:
　　1)竹葉椒鎮(zhèn)痛作用機制主要是抗炎鎮(zhèn)痛作用，阿片受體也有部分的參與。
　　2)竹葉椒的鎮(zhèn)痛作用可能是多種成分協(xié)同作用的結(jié)果。
　　3)結(jié)合已有的文獻，生物堿和木脂素類化合物可能是竹葉椒鎮(zhèn)痛

11、作用的主要活性成分;木脂素類化合物是其抗炎作用主要活性成分。
　　4)本研究得到了鎮(zhèn)痛活性成分芝麻素和去-N-甲基-白屈菜紅堿，以及抗炎活性成分(-)-fargesin和(-)-yangambin。
　　第二節(jié)、體外試驗
　　在炎癥發(fā)生時，巨噬細胞通過釋放前炎性因子(TNF-α，IL-6)，以及炎癥介質(zhì)(NO，PGE2)而積極參與炎癥反應過程。TNF-α和IL-6是炎癥中的關鍵因子，NO和PGE2的過度生成在炎性生理反

12、應過程中也發(fā)揮著重要作用。本文中，采用脂多糖(LPS)誘導RAW264.7建立炎癥模型，來研究竹葉椒的抗炎機制。主要得到以下主要的結(jié)果:
　　1)芝麻素、L-細辛脂素、(-)-fargesin、pinoresinol-di-3，3-dimethylally lether、去-N-甲基-白屈菜紅堿、木蘭堿都對NO的生成在不同程度上有抑制作用。
　　2) L-細辛脂素和木蘭堿在100μM時對Raw64.7誘導的IL-6的產(chǎn)生有顯

13、著的抑制作用。
　　3)芝麻素對LPS誘導的TNF-α的生成有抑制作用。
　　4)芝麻素、L-細辛脂素、(-)-fargesin、pinoresinol-di-3,3-dimethylally lether、去-N-甲基-白屈菜紅堿、木蘭堿都在不同濃度上對PGE2的生成有顯著的抑制作用。
　　竹葉椒抗炎的機制涉及對前炎癥細胞因子(TNF-α、IL-6)、炎癥介質(zhì)(NO、PGE2)釋放的抑制。
　　今后我們將對分離