參附心肌電生理效應(yīng)的離子通道機(jī)制及其成分基礎(chǔ).pdf

1、第一部分參附注射液對(duì)成年豚鼠在體心室肌細(xì)胞跨膜動(dòng)作電位的影響 目的：探討參附注射液(Shenfu Injection，SFI)對(duì)成年豚鼠在體心室肌細(xì)胞跨膜動(dòng)作電位的影響。 方法：隨機(jī)選取健康成年豚鼠10只，分為兩組(n=5)：生理鹽水組(C組)和SFI組(S組)。兩組分別給予生理鹽水、SFI(15ml·kg<'-1>，i.p.)處理。采用懸浮式微電極技術(shù)檢測(cè)在體心室肌細(xì)胞TAP如下指標(biāo)的變化：動(dòng)作電位振幅(TAP amp

2、litude，TAPA)、0期最大去極化速率(maximum velocity，V<,max>)、動(dòng)作電位復(fù)極10％、50％及90％時(shí)程(10％、50％、90％of action potential duration，APD10、APD50、APD90)、靜息電位(rest potential，RP)、超射值(over shoot，OS)等。以配對(duì)t檢驗(yàn)及方差分析(analysis of variance，ANOVA)等進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。

3、 結(jié)果：S組豚鼠處理后在體心室肌細(xì)胞TAPA由(76.8±5.4)mV降至(69.0±5.3)mV(P<0.05)，V<,max>由(208±14)V·s<'-1>降至(189±12)V·s<'-1>(P<0.01)；C組處理后TAPA由(77.1±9.2)mV變?yōu)?78.2±10.5)mV(P>0.05)，V<,max>由(208±49)V·s<'-1>變?yōu)?203±40)V·s<'-1>(P>0.05)。兩組組間比較時(shí)，兩指標(biāo)

4、差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義：TAPA，P<0.01；V<,max>，P<0.05。而APD10、APD50、APD90、RP、OS等指標(biāo)的兩組組內(nèi)及組間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論：SFI能減小豚鼠在體心室肌細(xì)胞跨膜動(dòng)作電位0期去極化幅度、減慢其速率，從而發(fā)揮相應(yīng)電生理效應(yīng)。 第二部分參附注射液及其主要成分的快鈉通道效應(yīng) 目的：排除在體干擾因素(神經(jīng)、體液等)影響下，以離體細(xì)胞為對(duì)象，以SFI主要成分作對(duì)比

5、，從分子水平觀測(cè)SFI等對(duì)心室肌細(xì)胞膜快鈉通道的直接作用，探討SFI的心肌電生理效應(yīng)的離子通道機(jī)制及藥效的成分基礎(chǔ)。 方法：采用急性酶解法分離獲取豚鼠左心室肌細(xì)胞，隨機(jī)選取30個(gè)，分為5組(n=6)：S、F、H、D、A組，分別給予10％SFI、10％附子有效成分(fuzi active ingredient，F(xiàn)ZAI)、10％紅參有效成分(hongshenactive ingredient，HSAI)、10mmol·L<'-1>

6、去甲烏藥堿(demethylcoclaurine，DMC)、10％輔料空白對(duì)照物處理。以全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)在電壓鉗模式下觀測(cè)各組處理前后胞膜快鈉通道電流(I<,Na>)的變化。隨機(jī)選取12個(gè)細(xì)胞，分為2組(n=6)：S、F組，分別以1.25％、2.5％、5％、10％、15％的濃度累積方式給予SFI或FZAI，用前述方法觀測(cè)藥物對(duì)IN。作用的量效關(guān)系。另隨機(jī)選取12個(gè)細(xì)胞，分為2組(n=6)：S、F組，分別給予10％SFI或10％FZAI處

7、理。以前述方法觀測(cè)各組處理前后快鈉通道動(dòng)力學(xué)(失活、失活后復(fù)活)相關(guān)各預(yù)設(shè)方案下鈉電流的變化，進(jìn)行相應(yīng)曲線擬合等處理。以t檢驗(yàn)及單因素、重復(fù)測(cè)量ANOVA、q檢驗(yàn)等進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果：S、F兩組各自用藥前后峰值電位下I<,Na>電流密度組內(nèi)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，而H、D、A各組組內(nèi)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。S、F兩組間比較及兩組分別與H、D、A組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，而H、D、

8、A各組兩兩比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。S、F組藥物均濃度依賴性地降低I<,Na>電流密度，在1.25％、2.5％、5％、10％、15％的藥物濃度下各抑制率兩兩比較：每組在10％與15％的藥物濃度下抑制率比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，S 組其余各比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，F(xiàn)組其余各比較差異亦均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(除1.25％與2.5％濃度下抑制率比較P<0.05外，其余均P<0.01)。用Hill方程擬合得：S

9、組藥物對(duì)I<,Na>電流密度的最大抑制率(E<,max>)為(22.21±1.15)％，半數(shù)藥效濃度(EC<,50>)為(2.98±0.25)％；F 組藥物的E<,max>為(19.62±2.81)％，EC<,50>為(4.04±0.35)％。兩組E<,max>差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但EC<,50>差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。S、F組用藥后I<,Na>的電流．電壓曲線均上移(但激活電位、峰值電位、反轉(zhuǎn)電位等曲線特征無(wú)

10、變化)：兩組用藥前各電壓水平下電流密度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；S組用藥前后在-40 mV、-30mV、-20 mV、-10 mV、0 mV、15 mV、30 mV電壓水平下電流密度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(后二者P<0.05，其余P<0.01)，而 -50 mV、-45 mV時(shí)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；F組用藥前后在-45 mV、-40 mV、-30 mV、-20 mV電壓水平下電流密度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(-20 mV時(shí)P<0.05

11、，其余P<0.01)，而其余各電壓水平下無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)?？焘c通道動(dòng)力學(xué)指標(biāo)檢測(cè)中，S、F組處理后較處理前通道失活曲線均左移、復(fù)活曲線均右移。擬合后特征參數(shù)各組用藥前后比較：失活曲線的 K值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，V<,1/2>及復(fù)活曲線的τ值差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而兩組間各指標(biāo)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論：SFI能直接阻滯胞膜快鈉通道電流，促進(jìn)通道失活，延緩其復(fù)活過(guò)程，可能是其