GRP78與卵巢癌化療耐藥的關(guān)系及其機(jī)制的研究.pdf

1、第一部分
　　 【目的】研究葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（GRP78）亞細(xì)胞含量與卵巢癌化療耐藥之間的關(guān)系。
　　 【方法】以一對(duì)卵巢癌配對(duì)細(xì)胞株C13K和OV2008為細(xì)胞模型，C13K細(xì)胞為卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞株，OV2008為細(xì)胞為卵巢癌順鉑敏感細(xì)胞株。運(yùn)用梯度濃度的順鉑分別處理OV2008及C13K，然后通過MTT法檢測(cè)這兩種細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性；Hoechest-33258染色法觀察順鉑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化；Annexi

2、nⅤ－PI雙染后通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)順鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡率；蛋白印跡法(Western blot)檢測(cè)順鉑處理前后OV2008和C13K中GRP78蛋白的表達(dá)差異。
　　 【結(jié)果】 MTT結(jié)果顯示，隨著順鉑濃度的升高，C13K和OV2008細(xì)胞抑制率均上升，而且C13K對(duì)順鉑敏感性明顯低于OV2008細(xì)胞；流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示，在同一濃度順鉑作用下，C13K細(xì)胞的凋亡率明顯低于OV2008細(xì)胞的凋亡率。Western blot檢測(cè)結(jié)果

3、顯示，C13K細(xì)胞中GRP78蛋白的表達(dá)水平明顯高于OV2008細(xì)胞，且經(jīng)順鉑處理細(xì)胞后，OV2008細(xì)胞中GRP78的表達(dá)較處理前明顯下降，而C13K細(xì)胞株中GRP78的表達(dá)未見下降。
　　 【結(jié)論】 GRP78基因的表達(dá)同細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性呈負(fù)相關(guān)，其在一定程度上參與了卵巢癌耐藥的發(fā)生。
　　 第二部分
　　 【目的】通過脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染SiRNA和GRP78誘導(dǎo)劑，探討GRP78在卵巢癌順鉑耐藥中的具體作用及

4、其機(jī)制。
　　 【方法】將公司構(gòu)建的針對(duì)GRP78基因的SiRNA通過脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染至順鉑耐藥株C13K細(xì)胞中。用GRP78誘導(dǎo)劑2-脫氧葡萄糖（2-DG）預(yù)處理順鉑敏感株OV2008細(xì)胞。經(jīng)順鉑處理這些細(xì)胞后，分別用MTT法檢測(cè)細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期，Western blot檢測(cè)相應(yīng)蛋白表達(dá)水平。
　　 【結(jié)果】轉(zhuǎn)染SiRNA-GRP78后，C13K細(xì)胞中GRP78蛋白的表達(dá)較對(duì)照組明顯

5、降低。下調(diào)GRP78后，C13K細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性較對(duì)照組顯著提高，流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果同時(shí)顯示，細(xì)胞的凋亡率較對(duì)照組顯著提高。Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)P-Akt表達(dá)也隨同GRP78表達(dá)下調(diào)；OV2008細(xì)胞經(jīng)2-DG預(yù)處理12h小時(shí)后，GRP78蛋白表達(dá)明顯升高。上調(diào)GRP78后，OV2008細(xì)胞順鉑誘導(dǎo)凋亡率明顯降低，同時(shí)Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)P-Akt蛋白表達(dá)較對(duì)照組明顯升高；OV2008細(xì)胞先后經(jīng)過P-Akt抑制