羅格列酮保護(hù)糖尿病大鼠腎損害及其對(duì)腎組織單核趨化蛋白-1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：越來(lái)越多的國(guó)內(nèi)外學(xué)者認(rèn)為糖尿病腎病是一種炎癥性疾病，其疾病的各個(gè)階段在腎組織都伴有白細(xì)胞的浸潤(rùn)。趨化因子可參與招募炎癥細(xì)胞亞群到局部腎組織，其中的單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)具有招募單核/巨噬細(xì)胞(M/M)的重要作用，這一觀(guān)點(diǎn)已經(jīng)在糖尿病腎病動(dòng)物模型以及1型和2型糖尿病患者腎活檢中多次被證實(shí)。浸潤(rùn)的M/M釋放各種物質(zhì)包括溶酶體酶、一氧化氮、反應(yīng)氧中介物或轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-B1等介導(dǎo)腎臟局部的炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致腎臟固有細(xì)胞增生，細(xì)胞外

2、基質(zhì)聚集，伴或不伴有腎小管纖維化，最終導(dǎo)致腎小球硬化。噻唑烷二酮類(lèi)(TZDs)是一類(lèi)通過(guò)能刺激過(guò)氧化物質(zhì)體增殖活化受體丫增強(qiáng)胰島素敏感性，減少胰島素抵抗達(dá)到控制血糖目的的藥物，它可以通過(guò)多種機(jī)制保護(hù)腎臟，包括降糖、降壓、改善血管內(nèi)皮功能、抗增殖及改變腎血流動(dòng)力學(xué)等多個(gè)方面。近年來(lái)，各國(guó)學(xué)者開(kāi)始關(guān)注TZDs的抗炎作用在糖尿病腎臟中的保護(hù)作用。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，TZDs可減少腎臟系膜細(xì)胞中白介素-1(IL-1)介導(dǎo)的IL-6和腫瘤壞死因子-a表達(dá)

3、增加；還可通過(guò)降低核因子k B的活性和MCP-1的生成從而抑制單核細(xì)胞的趨化；另外，TZDs還具有減少腎組織內(nèi)氧化應(yīng)激的作用。本實(shí)驗(yàn)旨在觀(guān)察馬來(lái)酸羅格列酮(TZDs類(lèi)抗糖尿病藥物)對(duì)鏈脲霉素(STZ)誘導(dǎo)的糖尿病大鼠腎臟保護(hù)作用及其對(duì)尿MCP-1排泄和腎組織MCP-1mRNA表達(dá)的影響，探討其保護(hù)腎損害的機(jī)制。 方法：將Wistar大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照(C組，n=8)、糖尿病組(D組，n=8)、羅格列酮治療組(R組，n=8)。大

4、鼠禁食24h后，D、R組單次腹腔注射鏈脲霉素[0.1mol/L無(wú)菌枸櫞酸緩沖液配制為6.5mg/ml(PH 4.3)]65 mg/kg。48h后采空腹尾靜脈血測(cè)血糖，以德國(guó)羅氏血糖儀測(cè)血糖≥16.7mmol/L者，入選糖尿病大鼠模型。糖尿病大鼠模型建立一周后，R組以馬來(lái)酸羅格列酮(5mg·kg-1·d-1)灌胃，D組和C組灌以相應(yīng)量的生理鹽水。第2，4，8周檢測(cè)各組大鼠尾外周血糖，第8周時(shí)以代謝籠收集12小時(shí)的尿液，測(cè)定尿白蛋白(ALB

5、)、視黃醇結(jié)合蛋白(RBe)和MCP-1的排泄水平，計(jì)算其排泄率。之后，處死大鼠，在宰殺大鼠的同時(shí)從股動(dòng)脈取血用于測(cè)定糖化血紅蛋白(BbAlc)。留取腎臟標(biāo)本，左腎用于稱(chēng)重、計(jì)算腎臟肥大指數(shù)=左腎重/體重(mg·g-1)，右腎部分用于病理學(xué)檢查，部分立即放置于液氮中待提取RNA，用于逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-timePCR)，對(duì)腎臟組織中的MCP-1進(jìn)行半定量及相對(duì)定量測(cè)定，分別采用MCP-1/

6、GAPDH的光密度比值和△△Ct相對(duì)定量法計(jì)算目的基因的含量(目的基因量：2-△△Ct)。 結(jié)果: ①血糖和糖化血紅蛋白：第2，4，8周，D、R組的血糖與c組的血糖比較，明顯升高(P<0.01)，而D組和R組兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。與C組比較，D組和R組第8周的糖化血紅蛋白水平均明顯升高(P<0.01)，但后兩組之間的數(shù)值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 ②尿ALB、RBP和MCP-1排泄率和腎臟肥大指數(shù)：第8周，

7、D、R組的尿ALB排泄率(UAER)，尿RBP排泄率和MCP-1排泄率與C組各值間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)；第8周，D、R組腎臟肥大指數(shù)也明顯高于C組(P<0.01)；與D組比較，R組中上述四項(xiàng)指標(biāo)均明顯降低(P<0.01)。此外，尿MCP-1排泄率與UAER(r=0.945，P<0.01)、尿RBP排泄率(r=0.879，P<0.01)及腎臟肥大指數(shù)(r=0.934，P<0.01)呈正相關(guān)。 ③電鏡結(jié)果：C組結(jié)構(gòu)清晰，無(wú)異

8、常病理表現(xiàn)；D組腎小球毛細(xì)血管基底膜增厚，系膜細(xì)胞腫脹，系膜基質(zhì)增多，系膜區(qū)擴(kuò)大；R組較D腎臟病理改變明顯減輕，同C組相比僅有少量病變，基底膜基木均勻一致，足突融合率明顯降低。 ④RT-PCR和Real-time PCR結(jié)果：在RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳條帶中，D、R組條帶亮度明顯強(qiáng)于c組條帶，其與管家基因GAPDH的光密度比值結(jié)果提示與C組相比，D組大鼠腎臟MCP-1mRNA表達(dá)明顯上調(diào)(P<0.01)，R組MCP-1mRNA

9、表達(dá)也增加(P<0.05)，但較D組有明顯的下調(diào)(P<0.05)。Real-time PCR法同樣得出相似的結(jié)論，與C組比較，D、R組MCP-1mRNA基因的表達(dá)量高于C組(P<0.01或P<0.05)。經(jīng)羅格列酮治療后，MCP-1在腎臟中的表達(dá)明顯下調(diào)(與C組比較，P<0.05或P<0.01)。 結(jié)論:羅格列酮對(duì)糖尿病大鼠腎臟具有確切的保護(hù)作用，可以降低ALB和RBP在尿液中的排泄，降低腎臟肥大指數(shù)，減輕腎臟的病理改變，其機(jī)制