PD-1與急性乙型肝炎進展相關性研究.pdf

1、目的:觀察急性乙型肝炎(Acute hepatitis B，AHB)發(fā)病過程中患者體內(nèi)HBV特異性CD8+T細胞上免疫抑制性分子程序性死亡因子1(Programmed cell death1，PD-1)的表達及其動態(tài)變化、功能特點，揭示其與記憶性T細胞形成的關系，探討PD-1與急性乙型肝炎進展的相關性。
　　 方法:合成4種識別HBV不同抗原表位的五聚體，同時采集16例HLA-A2陽性的急性乙肝患者病程早期的外周血，用五聚體染色

2、后，通過流式細胞儀分析HBV特異性CD8+T細胞的頻率及其表面PD-1分子的表達特點。同時進行肝功能、乙肝5項和血清HBV DNA檢測。并用肽刺激及細胞內(nèi)染色方法檢測HBV特異性CD8+T細胞的增殖和產(chǎn)生細胞因子的能力。而且，長期隨訪18例HLA-A2陽性的急性乙型肝炎患者，分早、中、晚期用流式細胞儀檢測HBV特異性CD8+T細胞上抑制性分子PD-1、記憶性細胞標志CCR7、CD45RA、CD127和活化標志CD38的表達，檢測凋亡情況

3、，檢測阻斷PD-1/PD-L1信號通路前后，不同階段HBV特異性CD8+T細胞增殖及產(chǎn)生細胞因子的變化情況，并結合臨床資料，綜合分析PD-1/PD-L1在急性HBV感染過程中與記憶性T細胞形成的關系。
　　 結果:所有AHB病人發(fā)病早期均表現(xiàn)出高頻度、多特異性的HBV特異性CD8+T細胞反應，并且PD-1表達在這些細胞上被明顯上調(diào)。體外阻斷PD-1/PD-L1間的相互作用能夠恢復HBV特異性CD8+T細胞分泌細胞因子的能力。相關

4、性分析也顯示PD-1分子的上調(diào)表達與轉氨酶水平呈正相關。隨訪發(fā)現(xiàn)，AHB病人發(fā)病早期表現(xiàn)出的高頻度、多特異性的HBV特異性CD8+T細胞反應和在HBV特異性CD8+T細胞上的PD-1高表達在晚期均明顯降低。而且，早期高表達PD-1的HBV表位特異性CD8+T細胞凋亡程度明顯高于中、低水平表達PD-1的HBV表位特異性CD8+T細胞。在高表達PD-1的病程早期，HBV特異性CD8+T細胞的增殖及產(chǎn)生細胞因子的能力均較弱，中、晚期隨著PD-

5、1的下降或消失，上述能力均明顯增強。早、中期阻斷PD-1/PD-L1信號通路可以明顯提高上述功能。隨著病程中、晚期肝功正常，HBsAg陰轉，HBVDNA低于檢測值，HBV特異性cD8+T細胞上記憶性細胞標志CCR7、CD45RA和CD127表達逐漸升高，而活化標志CD38表達逐漸下降，提示記憶性T細胞的形成。
　　 結論:在HBV急性感染過程早期PD-1/PD-L1通路在調(diào)節(jié)HBV特異性CD8+T細胞功能方面起重要作用。PD-1